红景天苷对人晶状体上皮细胞氧化损伤保护作用的研究

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白内障是世界范围内主要的致盲性眼病,我国白内障患者人数也有逐年增加的趋势。目前,白内障的治疗仍然以手术为主,可是手术给国家带来巨大的经济负担和社会问题。多年来,国内外医学工作者尤其是眼科学者一直致力于探索白内障的发病机制,寻求药物来延缓和防止白内障的发生发展。氧化损伤被公认为是白内障发生的关键因素。越来越多的研究也证实,除先天性白内障外,晶状体上皮细胞凋亡是各种类型白内障共同的细胞学基础。因此,减少晶状体上皮细胞的氧化损伤、抑制晶状体上皮细胞的凋亡,为延缓年龄相关性白内障的发生发展提供了新的思路。到目前为止,仍然没有有效的西药来防治白内障,中药在防治白内障方面的研究逐渐成为热点。红景天苷(salidroside,Sal)具有抗氧化、消除自由基的作用。但是,Sal是否能够抑制晶状体上皮细胞发生氧化损伤及凋亡,目前尚未见到相关的研究报道。目的研究红景天苷对发生氧化损伤的人晶状体上皮细胞(Human lens epithelialcells,HLECs)的保护作用,并探讨红景天苷对凋亡相关基因Bax、 Bcl-2及Caspase-3表达的影响,为探索红景天苷可能成为防治白内障发生的新药提供实验依据。方法(1)体外培养人晶状体上皮细胞。(2)处于对数增长期的细胞,分别加入不同浓度的H2O2和Sal,分别培养24h后,运用CCK-8法检测各组HLECs的增殖活力,选出符合要求的H2O2和Sal浓度。(3)制作细胞爬片,运用Hoechst33258细胞核染色法,从形态学上观察细胞的凋亡情况。(4)用浓度分别为30μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的Sal处理细胞24h后,再分别加入200μmol/L的H2O2共同作用12h后,运用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测不同分组HLECs的凋亡率。(5)采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术,研究凋亡相关基因Caspase-3、Bax及Bcl-2在mRNA水平上的表达情况。结果(1) H2O2浓度为200μmol/L时,能诱导HLECs凋亡约为50%(即IC50),因此,选择200μmol/L的H2O2为细胞氧化损伤的实验浓度。(2)不同浓度的Sal对细胞增长均无抑制作用,选择30μmol/L、50μmol/L、100μmol/L作为Sal的实验浓度。(3)正常细胞按实验分组进行干预后,采用Hoechst33258染色法进行细胞核染色,荧光显微镜下观察到正常晶状体上皮细胞细胞核呈浅蓝色的椭圆形或者圆形;H2O2损伤组有较多细胞的细胞核出现致密浓染;随着药物Sal浓度的增加,出现致密浓染的细胞核减少,并且凋亡细胞数减少。(4) Sal处理组与H2O2损伤组相比,凋亡细胞数减少,Sal处理组的Bax及Caspase-3基因表达减少,Bcl-2基因表达增加。结论Sal可以促进HLECs的增殖,对发生氧化损伤的HLECs有保护作用,降低细胞凋亡率,其机制可能与降低Bax及Caspase-3基因的表达,提高Bcl-2基因的表达有关。
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