耿氏假硬草(Pseudosclerochloa kengiana)种子生物学特性及对精噁唑禾草灵抗药性的研究

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耿氏假硬草(Pseuudosclerochloa kengiana 为小麦田特别是稻茬麦田的常见恶性杂草,严重危害农作物的安全。近年来由于大量、重复使用化学除草剂导致对其防治效果越来越差。本文以我国黄淮、长江中下游地区小麦田耿氏假硬草为主要对象,研究了其种子生物学特性以及对精噁唑禾草灵抗药性等问题。采用培养皿法和盆钵法进行了种子萌发和出苗实验,研究了耿氏假硬草种子休眠、萌发以及结实特性;通过整株生物测定法测定了江苏、安徽、山东、上海和河南地区的30个耿氏假硬草种群对精噁唑禾草灵的敏感性,并测定了抗精噁唑禾草灵耿氏假硬草种群的交互抗性以及多抗性;通过对抗精嗯唑禾草灵耿氏假硬草的靶标酶ACCase活性、基因序列、及其表达量的研究,明确了耿氏假硬草靶标酶抗性机理,并建立了耿氏假硬草ACCase基因dCAPS分子突变检测方法。具体结果如下:采用培养皿法和盆钵法分别进行种子萌发和出苗实验,测定萌发率并计算种子萌发指数、种子平均萌发时间等指标。研究发现耿氏假硬草种子具有一个月以上的休眠期,土下层积和低温水储利于解除种子休眠;种子萌发最适宜温度为15~20℃;萌发过程不需要光照刺激,且不同光照周期对种子萌发没有明显影响;在pH4~10范围内均可萌发,不同pH值之间种子萌发没有显著性差异;对水势不敏感,当水势大于-0.6MPa时其萌发率才有明显下降;具有较高的耐盐性,当NaCl浓度达到高浓度160mM时,其萌发率仍高达83%。种子在埋土深度小于0.5cm时出苗不受影响,当埋种深度大于2cm时,已基本不能出苗。不同生境条件下,耿氏假硬草穗平均长度为17.24cm,小穗长度4.93mm,每穗小穗数196,千粒重0.2403g。确定了耿氏假硬草具有一个月以上的休眠期且土下层积和低温水储可解除种子休眠。同时明确了温度、水势、盐分及埋土深度对种子的萌发具有一定的影响,而光照和pH对种子萌发没有影响采用整株生物测定法测定了 30个耿氏假硬草种群对精嗯唑禾草灵的敏感性,除了采自江苏扬州的JYJD-2种群之外其余所有种群对精噁唑禾草灵的有效抑制中剂量(ED50)值在 10~20 g a.i.ha-1 之间,而 JYJD-2 的 ED50 值则达到了 159.03 g ai.ha-1,远大于精噁唑禾草灵田间推荐剂量62 g a.i.ha-1,其相对于敏感种群JYJD-1的ED50值10.14 g a.i.ha-1其抗性倍数为15.68倍。同时,JYJD-2种群对精喹禾灵与唑淋草酯产生了较低的抗性,其相对抗性倍数为4.50与3.36倍。对高效氟吡甲禾灵、精吡氟禾草灵、炔草醋、恶唑酿草胺、烯禾咬、烯草酮敏感。其相对抗性倍数分别为0.77、0.93、1.20、1.34、1.12和1.48倍。JYJD-2种群对ALS抑制剂甲基二磺隆、甲咪唑烟酸和啶磺草胺的ED50值分别为5.71、45.41和4.94 ga.i.ha-1,均小于各药剂的田间推荐剂量。对光合抑制剂扑草净和异丙隆的ED50值分别241.81与906.22 g a.i.ha-1,相对抗性倍数为1.42与2.01倍。对有机磷类抑制剂草甘膦异丙胺盐的ED50值为257.60 ga.i.ha-1,相对抗性倍数为1.01倍。通过对抗性耿氏假硬草ACCase活性研究发现,随着精噁唑禾草灵酸浓度的升高,抗性和敏感耿氏假硬草ACCase活性出现不同程度的下降,敏感耿氏假硬草ACCase活性明显受抑,抗性耿氏假硬草ACCase活性下降趋势不明显。精噁唑禾草灵对抗性耿氏假硬草ACCae的IC50值为31.16士2.49μM,对敏感耿氏假硬草ACCase的IC50值为4.81±4.21μM,其相对抗性倍数为6.48倍。对耿氏假硬草ACCase基因序列研究发现,在抗性与敏感种群中均发现2条不同的ACCase序列ACC1;1和ACC1;2,而抗性种群JYJD-2的ACC1;1上第1999位的氨基酸序列由TGG变成TGC,从而导致由色氨酸(Trp)变成半胱氨酸(Cys)。用qPCR法测定敏感与抗性耿氏假硬草ACCase基因表达量随时间的变化,药剂处理后,敏感种群ACCase表达量先缓慢的上升,24h时达到最大值,然后下降,到5d后已基本不再变化。抗性种群ACCase基因表达量在药后24h之内变化不大,且与敏感种群比较并无显著性差异,到第3-7d与敏感种群相比,其相对倍数均在2倍以上。建立了 dCAPS分子突变检测方法,并检测了抗性耿氏假硬草W1999C的突变频率,在JYJD-2种群中,100株中有47杂合突变型(RS),53株纯合敏感型(SS)。本论文明确了耿氏假硬草种子休眠、萌发及结实特性。首次报道了耿氏假硬草ACCase W1999C突变形成的精嗯唑禾草灵抗性,从分子和生化水平明确了其靶标抗性机理。明确了抗精噁唑禾草灵耿氏假硬草对其他药剂的敏感性水平。并建立了耿氏假硬草ACCase基因dCAPS分子突变检测方法。
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