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菠萝(Ananas comosus(Linn.)Merr.)亦称凤梨,为凤梨科(Bromeliaceae)凤梨属(Ananas)多年生单子叶草本果树植物,具较高的食用和药用价值。而近年来海南省菠萝叶部病害发生较为严重,为明确病原,并提供防治依据,本研究基于海南省各地区的菠萝叶部病害的病样,采用组织分离法得到疑似病原菌,运用科赫氏法则鉴定并确认,再结合形态和分子生物学特征对病原菌进行了物种鉴定,然后针对其中可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)种群在多基因水平上进行了遗传多样性分析,而且使用2种生防菌HAB-2和HN-2的正丁醇粗提物分别对所得菠萝病原菌进行了抑菌初探。试验结果如下:1、对来自海南省琼中、乐东、澄迈、儋州、昌江、三亚、万宁、海口、东方、白沙、琼海、定安、五指山、保亭、屯昌、临高16个市县的菠萝叶部病样进行组织分离,共得到80余个分离株,经科赫氏法则鉴定并确认42株病原菌。根据来源地、菌落形态学特征、致病性等,选取各地代表菌株1-2株,最终得到18株代表病原菌,经过形态和分子特征鉴定,确定为2个属,3个种,即可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)16株;假可可毛色二孢(Lasiodiplodia pseudotheobromae)1株;画眉草弯孢(Curvularia eragrostidis)1株。其中假可可毛色二孢(L.pseudotheobromae)为菠萝新病原菌。2、分别使用生防菌HAB-2和HN-2正丁醇粗提物的2种浓度(10 mg/mL、50mg/mL),测试了其对可可毛色二孢(L.theobromae)代表菌株HNLD004、假可可毛色二孢(L.pseudotheobromae)菌株HNTC001和画眉草弯孢(C.eragrostidis)菌株HNLG02的抑制作用。结果显示HAB-2粗提物对毛色二孢属(Lasiodiplodia)2株菌的抑制作用较低,而对画眉草弯孢菌(C.eragrostidis)的抑制作用显著,10mg/mL时抑菌宽度为3.96±0.71 mm,50 mg/mL时抑菌宽度达到5.91±0.20 mm;而HN-2粗提物对L.theobromae、L.pseudotheobromae和C.eragrostidis 3株病原菌的抑制作用都相当显著,10 mg/mL时抑菌宽度分别达到2.97±0.48 mm、1.65±0.27 mm和5.01±1.00 mm,50 mg/mL时抑菌宽度分别达到5.63±1.06 mm、4.54±0.66 mm和6.74±0.62 mm。经过对比,2种生防菌粗提物对毛色二孢属(Lasiodiplodia)2株菌的抑制效果差异显著,而对C.eragrostidis的抑制效果差异不显著(10 mg/mL时,P=0.21>0.05,50 mg/mL时,P=0.09>0.05)。可见,HN-2菌株拥有安全、有效防治菠萝叶斑病的较大潜力。3、利用ITS、TUB2、EF-1α、GAPDH、CHS-1和ACT联合序列对来自16个市县的16株菠萝可可毛色二孢病原菌(L.theobromae)进行了遗传多样性分析,构建进化树。结果显示,该种群聚类为3个类群,即HNWN02、HNBT04、HNQH02、HNBS01、HNHK01、HNCJ02、HNDZ01、HNCM02和HNWZS03为一类群,主要集中在海南岛的中部地区;HNTC03和HNLG04为一类群,在中部偏北地区;而HNQZ003、HNLD004、HNSY02、HNDF01和HNDA03为一类群,主要集中在西南地区。