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目的：关于人卵泡液中存在着由卵丘颗粒细胞分泌的脑源性神经营养因子(BDNF)的报道提示：人卵巢中可能有BDNF赖以发挥其生物学效应的特异性高亲合力受体—酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)的存在。BDNF在人卵泡发育早期的表达情况，TrkB在人卵巢中的表达，影响TrkB在人卵巢的表达因素，BDNF在人卵泡发育过程中所发挥的功能，以及它们在人卵巢细胞内的信号转导机制均未见报道。本文研究BDNF和TrkB在人卵巢组织中不同发育阶段卵泡的表达及促性腺激素对其表达的影响。最后进一步研究BDNF对人卵巢黄素化颗粒细胞雌、孕激素分泌的影响及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)是否介导、如何介导这一过程。 第一部分 材料与方法：人卵巢组织来自因子宫颈癌或一侧卵巢肿瘤等原因而需行正常卵巢切除患者，年龄20岁至37岁，近3个月内未使用激素类药物，无其它疾病史。取卵日卵泡液、人卵巢黄素化壁层颗粒细胞(hMGLCs)、人卵巢黄素化卵丘颗粒细胞(hCGLCs)、未受精卵母细胞或未成熟卵母细胞来自因输卵管因素或男方因素不孕行体外受精—胚胎移植(IVF-ET)的患者。用免疫组织化学SABC法研究BDNF在人卵巢组织中不同发育阶段卵泡的表达，酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测BDNF在人卵泡液，hMGLCs和hCGLCs无血清培养上清液中的表达。用免疫组织化学SABC法研究TrkB在人卵巢组织不同发育阶段卵泡的表达，免疫细胞化学SABC法研究TrkB在未受精或未成熟卵母细胞，hMGLCs和hCGLCs的表达，Western blotting方法检测TrkB在hMGLCs和hCGLCs的表达及其差异。 结果：在正常的卵巢组织中BDNF表达于初级窦前卵泡(也可称之为初级卵泡)和次级窦前卵泡(也可称之为次级卵泡)的颗粒细胞，在次级卵泡的表达强于初级卵泡。卵泡液、排卵前卵泡的hCGLCs无血清培养上清液中存在BD刊rF，排卵前卵泡的llMGLCs不分泌BDN下。正常的卵巢组织中TrkB表达于初级卵泡、次级卵泡的颗粒细胞及窦状卵泡的壁层颗粒细胞，T比B的表达强度以窦状卵泡的壁层颗粒细胞最强，其次为次级卵泡的颗粒细胞，最弱为初级卵泡的颗粒细胞。排卵前卵泡的卵母细胞、hMGLCs、hcGLCs均有TrkB的表达，且TrkB在排卵前卵泡的1】MGLCs表达量高于hCGLCs。 第二部分 材料与方法:体外培养的hMGLCS和hCGLCs来自因输卵管因素或男方因素不孕而行IvF一ET的患者。用EuSA方法检测不同浓度(2.5刀口几，5 IU几，10F口/L)人绝经期促性腺激素(bMG)对hCGLCs分泌BDN下的影响，we sternbl。伪恤g方法检测上述不同浓度hMG对hMGLcs表达TrkB的影响。 结果:实验组中用bMG 2.51U/L、51U/L、10D口/L处理hCGLCs后的细胞培养液中BDNF的浓度值分别为247.65士31.06 pg/mL、254.95士62.38 pg/inL、262.63士57.54 pg/m工，对照组为218.19士33.82 pg/功工，三个不同浓度处理的实验组hCGLCs分泌BD刊[F量均高于对照组，其差异有统计学意义，三个不同浓度处理的实验组之间比较随着hMG应用浓度的增高hCGLCs分泌BDNT的量有上升趋势，但差异无统计学意义。对w estern bfo伪恤g结果进行灰度值测定，阳性反应部位的灰度值分别为106.1肚6.01(对照组)，124.21士4.24(2.5P口/L组)，123.61料.38(SIU几组)，123.79士6.98(10p口几组)。统计学分析表明，实验组三个不同浓度处理后的hMGLCs表达TrkB量均高于对照组(尸<0.05)，实验组之间比较表达无显著差异。 第三部分 材料与方法:体外培养的hMGLCs来自因输卵管因素或男方因素不孕行IVF一ET的患者。以50 ng/mL，100 ng/mL，200 ng/m工浓度的BDNF分别作用于hMGLCs 20 min，以100 ng/mLL浓度的BDNT分别作用于hMGLCs 10 min，20 mln，30 mln，用westembl毗访g方法分析MApK家族成员一p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)和细胞外调节激酶2 (ERK.2，即p44 MApK)在hMGLCs的磷酸化情况。加入1 2.5 nghnL，25.0 ng/rnL，50.0 ng/山工，100.0 ng/mL四种不同浓度的BDN下分别作用 4于hMGLcs 24h，另三组分别用T论B的特异性抑制剂K252a，p38 MA卫K的特异性抑制剂sB203580，p44侧以①K的特异性抑制剂PD98059预先处理细胞30 min，然后以100.0 ng/山工浓度的BDNF分别作用于这三组细胞24h，采用酶免疫测定法(EIA)检测hMGLCs培养上清液中雌二醇(几)和孕酮(孔)水平。 结果:随着BDN下作用剂量的增大和作用时间的增加p38 MApK的磷酸化水平增高，呈剂量和时间依赖性。随着BDNFF作用剂量的增大和作用时间的增加好4 MApK的磷酸化水平降低，呈剂量和时间依赖性。BDNrF促进体外培养的bMGLCs几的分泌，抑制P4的分泌，且呈剂量依赖性。TrkB抑制剂K252a加入组几浓度和巧浓度分别低于和高于100.0ng/lnL BDN下组，差异均有统计学意义(P<0.05)。p38 MApK的特异性抑制剂sBZo358o加入组E2水平低于100.0 ng/rnL aDN下组(六0.05)，但P;水平高于该组印仗0.05)。p44 MA卫K的特异性抑制剂PD98059加入组几水平与100.0翔岁功工BDN下组比较有上升的趋势，差异无统计学意义，P;浓度与100.0 ng/加L