目的和意义随着微波在日常生活中的广泛应用,其造成的辐射损伤效应也随之受到越来越多的关注,而针对微波辐射损伤防治药物却比较少见。本课题组前期研究发现,9714对于微波辐射损伤有一定治疗作用,本实验旨在探索9714治疗微波辐射损伤的敏感靶标、有效剂量及其机制。材料和方法取100只二级Wistar雄性大鼠,随机分为5组:即空白对照组,辐射对照组和低、中、高剂量9714治疗组。采用30mW/cm²的微波对大鼠进行全身均匀辐射,辐射时间为15min,辐射后即刻灌胃给予9714,给药剂量分别为15mg/kg/d低剂量组、30 mg/kg/d中剂量组和60 mg/kg/d高剂量组,连续给药14d。分别在停药后6h（辐射后14d）和停药后7d（辐射后21d）采用Morris水迷宫方法检测大鼠的学习和记忆能力;采用高效液相色谱对海马组织内氨基酸类神经递质含量进行检测;采用全自动血细胞分析仪检测大鼠外周血中白细胞计数、淋巴细胞计数以及淋巴细胞百分比;采用流式细胞仪对大鼠外周血T淋巴细胞亚群中CD₄与CD₈比值进行检测;采用γ放射免疫计数器对大鼠外周血中血清细胞因子IL-2、IL-4及外周血血清睾酮进行检测;采用Pearson二甲亚砜法通过琥珀酸脱氢酶（succinic acid dehydrogenase,SDH）染色对脑内能量代谢变化进行检测;采用羟胺比色法对海马内乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）含量及乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AchE）活性进行检测;经苏木素-伊红染色采用光镜对脑、睾丸、胸腺及脾脏形态结构进行观察,采用醋酸铀和柠檬酸铅双重染色通过透射电镜对脑、睾丸、胸腺及脾脏超微结构进行观察;采用Western blot法对海马组织内M₁受体蛋白含量进行检测;采用实时荧光定量PCR法对海马组织内M₁受体、N_α7受体的mRNA进行检测。实验结果1.大鼠学习和记忆能力改变:30mW/cm²微波辐射在停药后6h⁷d（辐射后14²1d）,辐射对照组大鼠平均逃避潜伏期延长（P<0.05）;与辐射对照组比,15mg/kg/d和30mg/kg/d治疗组平均逃避潜伏期缩短（P<0.01）,60mg/kg/d治疗组无明显改变。2.大鼠海马组织内氨基酸类神经递质含量改变:停药后6h（辐射后14d）,辐射对照组4种氨基酸（Glu、Gly、Asp、GABA）含量均显著升高（P<0.01）,3个9714治疗组均能调节辐射引起的氨基酸代谢紊乱,其中15mg/kg/d 9714治疗组调节作用最为显著（P<0.01）。停药后7d（辐射后21d）,辐射对照组4种氨基酸含量均呈降低趋势,各给药组均能恢复此紊乱,其中15mg/kg/d和30mg/kg/d治疗组效果较明显。3.大鼠外周血中白细胞计数、淋巴细胞计数、淋巴细胞百分比及T淋巴细胞亚群中CD₄与CD₈比值改变:停药后6h及7d（辐射后14d及21d）,辐射对照组大鼠外周血白细胞计数和淋巴细胞计数呈降低趋势,3个9714治疗组未见明显改善,淋巴细胞百分比各组均无明显改变;停药后6h（辐射后14d）,大鼠外周血T淋巴细胞亚群中CD₄与CD₈比值均呈升高趋势,停药后7d（辐射后21d）,大鼠外周血T淋巴细胞亚群中CD₄与CD₈比值均呈降低趋势,9714治疗对CD₄与CD₈比值无明显影响。4.大鼠外周血细胞因子IL-2、IL-4和睾酮改变:停药后6h（辐射后14d）,大鼠外周血血清中IL-2含量呈降低趋势,IL-4含量呈升高趋势,停药后7d（辐射后21d）,大鼠外周血血清中IL-2、IL-4含量均呈降低趋势,9714治疗对IL-2、IL4含量均显著治疗作用;停药后6h（辐射后14d）,睾酮含量呈升高趋势,停药后7d,睾酮含量显著降低（P<0.01）,9714治疗对睾酮含量无明显影响。5.大鼠海马组织能量代谢酶SDH改变:停药后6h（辐射后14d）,大鼠海马组织中SDH含量呈降低趋势,各9714治疗组与辐射对照组相比无明显差异。6.大鼠海马组织Ach含量和AchE活性变化:停药后6h及7d（辐射后14d及21d）,辐射对照组大鼠海马组织中Ach含量均显著降低（P<0.01）,与辐射对照组相比,各9714治疗组Ach含量均升高,其中15mg/kg/d³0mg/kg/d治疗组治疗作用较好;停药后6h（辐射后14d）,辐射对照组大鼠海马组织中AchE活性显著升高（P<0.01）,各9714治疗组均能改善此变化,其中15mg/kg/d和30mg/kg/d治疗组改善作用明显;停药后7d（辐射后21d）,辐射对照组大鼠海马组织中AchE活性略有升高,各9714治疗组均能改善此变化。7.主要靶器官组织学和超微结构改变:停药后6h及7（d辐射后14d及21d）,辐射组大鼠海马组织光镜下可见神经元固缩、深染,成梭形或不规则形,血管周间隙增宽,细胞外间质水肿;电镜下可见神经元线粒体肿胀空化,突触囊泡堆积,血管周间隙增宽。给予不同剂量9714后,脑组织形态结构损伤均有所减轻,3个9714治疗组均有一定保护作用;睾丸组织光镜下可见生精上皮疏松,生精小管中部空虚,电镜下可见精原细胞染色质凝集、边移,精母细胞线粒体肿胀、空化,给予不同剂量9714,睾丸组织形态结构损伤未见明显改善;胸腺和脾脏组织光镜下可见部分淋巴细胞变性、坏死,电镜下可见部分淋巴细胞核染色质固缩、深染,核膜间隙不清,给予不同剂量9714,胸腺和脾脏组织形态结构损伤未见明显改善。8.大鼠海马组织中M₁受体蛋白表达改变:停药后6h（辐射后14d）,辐射对照组大鼠海马组织中M₁受体蛋白表达呈降低趋势,与辐射对照组相比,15mg/kg/d 9714治疗组M₁受体蛋白表达呈升高趋势;停药后7d（辐射后21d）,辐射对照组大鼠海马组织中M₁受体蛋白表达显著降低（P<0.01）,与辐射对照组相比,15mg/kg/d 9714治疗组M₁受体蛋白表达呈升高趋势。9.大鼠海马组织M₁和N_α7受体mRNA表达改变:停药后6h（辐射后14d）,辐射对照组大鼠海马组织中M₁受体mRNA表达量显著降低（P<0.01）,与辐射对照组相比,15mg/kg/d 9714治疗组M₁受体mRNA表达量呈升高趋势;停药后7d（辐射后21d）,辐射对照组大鼠海马组织中M₁受体mRNA表达量呈升高趋势,与辐射对照组相比,15mg/kg/d 9714治疗组M₁受体mRNA表达量仍呈升高趋势;停药后6h（辐射后14d）,辐射对照组大鼠海马组织N_α7受体mRNA表达量显著升高（P<0.01）,与辐射对照组相比,15mg/kg/d 9714治疗组N_α7受体mRNA表达量降低（P<0.05）;停药后7d（辐射后21d）,辐射对照组大鼠海马组织中N_α7受体mRNA表达量升高（P<0.05）,与辐射对照组相比,15mg/kg/d 9714治疗组N_α7受体mRNA表达量呈降低趋势。实验结论一、30mW/cm²微波辐射后14d和21d,可引起大鼠学习和记忆能力下降、氨基酸类神经递质代谢紊乱;睾酮含量降低;Ach含量降低以及AchE活性升高;脑、睾丸、脾脏及胸腺组织学和超微结构改变。二、给予15mg/kg/d⁶0mg/kg/d 9714,对微波辐射导致的大鼠在行为学、氨基酸类及胆碱类神经递质以及脑组织形态结构方面的损伤有一定的治疗作用,而对微波辐射导致的大鼠在免疫、生殖方面的损伤未见明显治疗作用。三、9714治疗微波辐射损伤的敏感靶标为脑。四、9714对微波辐射致脑损伤的治疗作用在15mg/kg/d³0mg/kg/d范围内较好,15mg/kg/d 9714为最佳有效治疗剂量。五、9714对微波辐射致脑损伤的治疗作用可通过调节N_α7受体基因表达发挥作用。