论文部分内容阅读
研究背景类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一种以全身性、对称性的关节滑膜炎为主要表现的自身免疫性疾病;自身抗体可存在于该患者的血清、关节液内,而体内大量异常表达的自身抗体不仅与疾病临床诊断有关,也与某些特殊的临床症状或疾病亚型相关。在2010年美国风湿病学会（American College of Rheumatology,ACR）和欧洲抗风湿联盟（European Alliance Against Rheumatism,EULAR）共同发布的RA诊断标准中就包含了抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体,ACCP）和类风湿因子（Rheumatoid factor,RF）,血清学抗体可早于典型的临床症状或影像学改变被检测到,现已有很多自身抗体被应用于RA患者的临床诊断中,但约有60%的RA患者不存在这些抗体。目前RA诊断标准中仍缺乏能够辅助诊断早期RA的自身抗体指标,以及对于疑似RA血清学改变人群的检测手段。RA作为一种具有临床异质性的疾病,不同患者的临床表现大不相同,且随着病程的进展,患者血清学和免疫学指标变化较大,不典型表现的RA患者的诊断仍是临床工作的一大难点。现有大量国内外相关文献也已经证实存在很多种与RA相关的自身抗体,但兼具高敏感性和高特异性的自身抗体仍需进一步探索。近年来,人类蛋白质芯片技术在蛋白质组学研究中被广泛运用,随着该项技术水平的不断提高,Hu ProtTM人类重组蛋白芯片已成为目前世界上通量最高的蛋白芯片,仅需微量样本即可同时对蛋白芯片上发生抗原抗体结合的蛋白进行分析,因而在研究多种疾病的血清标志物中具有很大的优势。本研究利用该项芯片研究RA患者中血清学自身抗体的表达情况。目的筛选并初步鉴定RA患者新型自身抗体,并评估其在RA中的诊断价值。方法本课题采用病例对照研究方法,整体实验主要分为两个阶段:（1）第一阶段小样本探索实验:使用Hu ProtTM人类蛋白芯片选取5例RA患者和5例健康对照血清,初步筛选具有一定差异的潜在自身抗原。（2）第二阶段大样本验证实验:基于第一阶段中的筛选结果定制芯片（包括Ig G型和Ig M型两种类型）,扩大样本进行验证,共选取94例健康对照者和72例RA患者;再评估具有差异表达的单个自身抗体或抗体组合对RA的诊断价值,并采用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析各单个差异的诊断价值,然后用Logistic回归分析构建预测RA风险的差异抗体组合判别模型,采用ROC曲线分析探讨组合的诊断价值。最后用ELISA法在65例RA患者和38例健康对照组的血清中验证抗UBA5抗体（抗泛素样修饰激活酶5抗体,anti-UBA5）对RA患者的诊断价值。结果第一阶段:本研究通过人类蛋白芯在筛选的近20000个蛋白中,建立RA患者血清差异表达的抗体谱,将符合P<0.05且fold change>1.5的蛋白纳入第二阶段,最终共选取35种蛋白。第二阶段:定制上述35种蛋白对应的芯片,最终筛选得出:（1）在RA患者中共有23种Ig G型抗体水平明显高于健康对照组（P<0.05）,其中抗MAPK1IP1L、抗RBPJ、抗FAF1、抗PDE1B和抗WBSCR27自身抗体组合对诊断RA的灵敏性和特异性分别为75.3%和70.8%,ROC曲线下与坐标轴围成的面积（AUC）为0.779;该抗体组合对于诊断ACCP和RF双阴性的RA的灵敏性和特异性分别为83.3%,65.6%,AUC 0.800;（2）与健康对照组相比,RA患者血清中共有10种Ig M型抗体水平显著升高（P<0.05）,其中抗PAFAH1B3、抗BDH2、抗SH3BGR抗体组合对诊断RA具有65.7%的灵敏度和79.2%的特异度,AUC 0.784。此外,通过ELISA法验证结果显示:抗UBA5抗体在RA（尤其是活动期RA）患者中具有较高的诊断价值。结论1.与健康对照相比,RA患者血清中有23种Ig G型抗体（SH3BGR,WBSCR27,AKT2,MAPK1IP1L,ANP32A,PAFAH1B3,SMUG1,TUBA8,SHFM1,UBA5,RBPJ,BCAS2,RANGAP1,GARS,C9orf142,NXPH2,GPI,BDH2,FAF1,PSMA3,IDI2,PSAT1,PDE1B）水平显著升高;有10种Ig M型抗体（SH3BGR,AKT2,ANP32A,PAFAH1B3,SMUG1,UBA5,GARS,C9orf142,BDH2,PSAT1）水平显著升高。2.多种自身抗体联合检测可以增加其在类风湿关节炎中的诊断价值,抗MAPK1IP1L、抗RBPJ、抗FAF1、抗PDE1B、抗WBSCR27的Ig G型抗体联合检测以及抗PAFAH1B3、抗BDH2、抗SH3BGR的Ig M型抗体的联合检测对RA的诊断均具有较高的敏感性和特异性。3.抗UBA5抗体在RA诊断和鉴别诊断中具有较高的价值,与RA病情活动有关。