论文部分内容阅读
肾上腺肿瘤是威胁人类健康的严重疾病之一,最常见的症状是血压异常,如顽固性高血压,其中高血压危象是该病致死的重要原因。目前对该病研究主要是含少数病例的临床实验,但临床病例样本量相对不足限制了更深入的研究。本研究第一步是建立一种肾上腺肿瘤动物模型,为肾上腺肿瘤治疗学研究提供一个较理想的平台,有助于开展大样本动物实验。其次,在该动物模型上,研究了钬激光对肾上腺肿瘤的毁损效应,为建立一种新型肾上腺肿瘤微创治疗技术提供了实验依据。第一部分:兔VX2肾上腺肿瘤模型制备及超声影像学观察研究目的:制备VX2接种诱导的兔肾上腺肿瘤动物模型并进行超声影像学观察。方法:将60只新西兰健康兔随机等分为接种7 d组、14 d组、21 d组及28 d组,采用直视注射法将VX2肿瘤细胞悬液接种到兔左肾上腺,观察接种后各组动物肿瘤的影像学表现、接种前后耳正中动脉压变化并计算高血压发病率、肿瘤平均体积、接种成功率,最后行肿瘤组织形态学观察。结果:肿瘤接种2周后B超可准确定位肿瘤;接种前后耳正中动脉压均在正常范围,高血压发病率为0;肿瘤总体接种成功率为93.3%;肿瘤体积随接种时间延长而增大,各组肿瘤平均体积差异均有统计学意义(P<0.01)。病理检查证实接种2~3周的动物模型最适宜用于肿瘤相关研究。结论:成功制备兔VX2肾上腺肿瘤动物模型,该模型能较理想的模拟非功能性肾上腺肿瘤,且模型稳定,制备简便,成功率高,易于观察,可为肾上腺肿瘤治疗学相关研究提供一个可靠的平台。第二部分:钬激光对兔肾上腺肿瘤的毁损效应的实验研究研究目的:探索钬激光(Ho:YAG laser)对肾上腺肿瘤的毁损效应。方法:以兔为实验对象制作肾上腺VX2肿瘤模型,首先行照射实验:直视下采用钬激光对肾上腺肿瘤组织进行毁损照射,观察照射后肿瘤组织及周边肾上腺组织、血管的病理变化,测量计算肿瘤坏死灶体积(mm3)及相应的钬激光总能量(KJ),SPSS15.0统计学软件作两参数相关性分析及直线回归;然后行对照实验,分照射组与假性照射组,各取10只动物行相应处理2 wk后处死,比较肿瘤的生长情况。测量计算肿瘤平均体积,SPSS15.0统计学软件作两均数t检验。结果:在照射实验中,钬激光照射后肿瘤立即行HE染色可发现肾上腺肿瘤细胞发生凝固性坏死,肾上腺周围组织有轻度炎性反应,未见腹主动脉、下腔静脉、肾脏等重要器官副损伤,肿瘤损毁灶大小随钬激光的照射能量增大而增大,并有统计学意义(p<0.05)。在对照实验中发现,所有照射组动物的肿瘤原发灶均被完全破坏,而假性照射组的肿瘤原发灶未被破坏,肿瘤平均体积较照射组大,有统计学意义(p<0.05)。结论:钬激光对兔的肾上腺VX2肿瘤组织有明确杀伤作用,并有副损伤很少的优点及良好的可操控性。在影像学设备引导下可作为一种新型微创治疗肾上腺肿瘤的手段。研究目的:本研究最终目的是实现衰竭肾脏结构功能的原址重建,本实验仅为初步研究,是利用多种脱细胞剂通过半自动体外循环灌注洗脱肾脏部分细胞基质,摸索出最佳脱细胞剂种类及脱细胞方案。方法:以健康兔肾为研究对象,采用半自动体外循环灌注法,在10-15ml/min流速及不同浓度、温度条件下经肾动脉灌注各种脱细胞剂,本实验采用的脱细胞剂及灌注方案包括:1%SDS(25℃,1h/2h),1%Triton-100(25℃,1h/2h),无离子水(25℃,1h/2h)、1mol/lNaCL溶液(25℃,1h/2h)、80% PEG(25℃,1h/2h)、0.125%胰蛋白酶(25℃,1h/2h)、0.5%胰蛋白酶(25℃,1h/2h)、0.5%胰蛋白酶(37℃,10min/20min)、0.05%Ⅳ型胶原酶(37℃,10min/20min)、0.1%Ⅳ型胶原酶(37℃,10min/20min),观察肾脏灌注过程中变化,灌注结束解剖肾脏,大体观察后行HE染色及组织形态学观察,重点观察肾小球、肾小管细胞结构的变化。结果:比较理想的肾脏脱细胞方案是1%Ⅳ型胶原酶-37℃-20min,该酶能在相对较短的时间内洗脱部分肾实质细胞而对肾脏基质未造成明显损伤。该方案灌注时间短,能减少肾脏热缺血时间,有助于肾脏再生。其次是0.5%胰蛋白酶-25℃-2h,该方案能使肾小球细胞比较彻底的脱出,只留基质部分,对肾小管作用较小,但该方案用时较长,已达到肾脏体外耐受缺血的极限,理论上肾脏灌注后很可能会因缺血缺氧时间过长而坏死,故不推荐使用。洗脱效果最强的脱细胞剂是SDS,但其对肾脏实质结构造成不可恢复的破坏,尤其是引起基底膜断裂不利于肾实质细胞再生。其他脱细胞方案均不理想。结论:本研究证实通过选择适当的脱细胞剂,配合适合的温度、浓度、灌注压等条件,是可以实现肾脏部分脱细胞基质的,为下一步研究衰竭肾脏的部分脱细胞基质甚至是在体灌注乃至脱细胞后肾脏结构功能的重建提供了实验依据。