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肿瘤的发生是个多因素过程,从基因学的角度来看主要是由于癌基因的活化和抑癌基因的失活引起的,而肿瘤的生长也是通过细胞增殖与细胞凋亡这两条相反的途径来调节。p53基因是一种肿瘤抑制基因,它在预防肿瘤发生中的重要作用在于可使发生基因突变的细胞生长过程停滞并发生凋亡。p53基因活化后能抑制肿瘤的形成,突变的p53基因则失去了这个作用。研究发现突变的p53基因在大多数人类肿瘤中存在,它通过一系列复杂的分子调节机制促进了肿瘤的形成。Rho家族蛋白是Ras超家族中小分子量G蛋白的成员之一,它在细胞生长分化过程中起了多种重要的作用,例如细胞骨架的重组,细胞内微管的形成,细胞的粘附作用及细胞的极性等等。与Ras超家族的所有成员类似,Rho家族蛋白在非活性GDP结合形式和活性GTP结合形式之间循环。它的活化依靠两种蛋白:鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEFS)及GTP酶活化蛋白。RhoA也是小分子量G蛋白的成员,它在参与维持细胞形态、细胞的粘附作用及细胞周期调控中起重要作用。研究表明,RhoA是潜在的癌基因,它的激活促进了肿瘤细胞的恶性化程度。国外最近的研究发现,作为RhoA的控制开关的GEFS可能是突变的p53基因产物的作用靶点,可被其激活,从而促使肿瘤细胞加快生长。而且已发生p53基因突变的癌细胞的生长也要依靠GEFS的促进,两者之间存在相互协同作用。野生型的p53基因则没有这个作用。这提示突变的p53基因可能通过激活RhoA的这条途径,参与肿瘤细胞生长、增殖及凋亡等生物学行为的调控。目的:从分子生物学水平检测RhoA、突变p53基因及蛋白在人HCC组织、癌旁组织及正常肝脏组织中的表达,分析RhoA与肝细胞癌临床病理特征的关系及RhoA与突变p53在HCC组织中表达的相关性,探讨RhoA在肝细胞癌发生、发展中的作用以及突变的p53基因对RhoA表达的影响。方法:选择重庆医科大学附属第二医院2006年5月～2007年2月手术切除经病理诊断证实的31例HCC标本,分别应用免疫组化方法,逆转录多聚酶链反应法(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)对31例HCC组织、相应的癌旁组织及6例正常肝组织中RhoA及突变p53基因和蛋白的表达进行定性和半定量研究,结合肝癌的分化程度、肿瘤大小、AFP水平、HBsAg、有无肝硬化等分析RhoA在HCC组织中的表达特征。同时检测RhoA蛋白及p53在HCC组织中的表达情况,并分析RhoA与突变p53及相关基因表达的相互关系。结果: (1)免疫组化显示:①在HCC组织中RhoA蛋白表达阳性率61.3%(19/31)明显高于癌旁组织的阳性率14.8%(4/31),两者比较有显著性差别(P<0.01)。②HCC组织中突变p53蛋白表达阳性率45.2%(14/31)明显高于癌旁组织的阳性率16.1%(5/31),两者比较有显著性差别(P<0.01)。③低分化的HCC组织RhoA表达阳性率78.3%(18/23)高于高分化HCC组织12.5%(1/8),两者比较有显著性差别(P<0.05);有转移的HCC组织中RhoA表达率92.3%(12/13)显著高于无转移的HCC组织38.9%(7/18),两者比较有显著性差别(P<0.01);并发肝硬化的HCC组织中RhoA的表达阳性率72.0%(18/25)高于不并发肝硬化HCC组织16.7%(1/6),两者比较有显著性差别(P<0.05)。而对于HbsAg的阳性率,AFP水平及肿瘤大小并无显著的相关性。(2)RT-PCR半定量分析结果表明:①RhoA mRNA在癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为为0.628±0.012和0.349±0.012,两者比较有显著性差别(P<0.01)。②突变的p53 mRNA在癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0.395±0.017和0.310±0.013,两者比较有显著性差别(P<0.01)。③低分化的HCC组织RhoA mRNA表达量(0.666±0.012)明显高于高分化HCC组织0.520±0.037,两者比较有显著性差别(P<0.01);有转移的HCC组织中RhoA mRNA表达量0.701±0.010显著高于无转移的HCC组织0.576±0.011,两者比较有显著性差别(P<0.01);并发肝硬化的HCC组织中RhoA mRNA的表达量0.656±0.012明显高于不并发肝硬化HCC组织0.512±0.040,两者比较(P<0.01)。而对于HbsAg的阳性率,AFP水平及肿瘤大小并无显著的相关性。(3)相关性分析显示:①免疫组化显示p53阳性的HCC组织中RhoA同时表达阳性率为85.7%(12/14),而p53阴性的HCC中RhoA同时阴性率为41.2%(7/17),用Fisher精确检验证明两者的表达特征具有明显的一致性(P<0.01)。②RT-PCR中RhoA与突变的p53用Pearson相关分析其相关性,Pearson相关系数r=0.754(P<0.01),从基因水平进一步说明说明RhoA与p53有显著的正相关性,其结果与免疫组化一致。结论:(1)RhoA高表达参与了肝癌的发生、发展,其表达水平与肝细胞癌的分化程度、是否转移及有无肝硬化有关,但与肿瘤大小、AFP水平及是否有乙型肝炎并无明显关系。(2)RhoA与突变的p53在肝细胞癌中的表达明显相关,突变的p53基因可能通过激活RhoA基因从而加速肿瘤的生长。