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目的:从中医理论探寻治疗肾纤维化的方法,建立单侧肾切除及微渗透泵灌注血管紧张素Ⅱ诱导小鼠肾纤维化模型,从巨噬细胞和炎症角度观察抗纤灵方抗肾纤维化的疗效和机制。 方法:1.中医理论:通过对祖国医学及海派名医童少伯及何立群教授治疗慢性肾脏病学术思想研究,发掘活血化瘀法及抗纤灵方在抗肾纤维化中的重要作用。2.实验研究:将60只c57BL/6小鼠分为正常组、生理盐水对照组、模型组、抗纤灵组、蒙诺组5组,每组12只。生理盐水对照组、模型组、抗纤灵组、蒙诺组行单侧肾切除并植入微渗透泵,生理盐水对照组的微渗透泵灌注生理盐水,模型组、抗纤灵组、蒙诺组的微渗透泵灌注血管紧张素Ⅱ。生理盐水对照组、模型组自由进食,抗纤灵组抗纤灵方灌胃、蒙诺组蒙诺灌胃。术前及术后每2周无创血压仪测小鼠血压,术后4周观测小鼠血尿素氮、肌酐、24h尿蛋白定量的变化,肾组织MASSON染色、HE染色观察肾间质等病理学改变,免疫组化检测a-SMA、CollagenⅠ、CD68、CD45、Veam-1的表达,western blot检测a-SMA、CollagenⅠ、CD68、CD45、Vcam-1表达情况。 结果:1.中医理论:慢性肾脏病是一个复杂的过程,应将疾病分阶段进行讨论和治疗,五脏中肺、脾、肾三脏在慢性肾脏病中最为重要,阴液的亏损也需要及时的纠正和补充,“阳损及阴”的理论也应贯彻治疗慢性肾脏病的始终,瘀血是慢性肾脏病中最重要的病理产物及致病因素。2.实验研究:造模后第二周,生理盐水对照组及模型组的血压较正常组升高(P<0.05,P<0.01),造模后第四周,模型组血压较正常组升高(P<0.01),生理盐水对照组、抗纤灵组及蒙诺组血压较模型组下降(P<0.05)。生理盐水对照组及模型组的血肌酐数值较正常组显著上升(P<0.05);模型组及蒙诺组的血尿素氮数值较正常组显著上升(P<0.05);正常组、生理盐水对照组及蒙诺组24小时尿蛋白定量较模型组显著下降(P<0.01)。Masson染色结果:模型组Masson结果阳性率显著高于正常组和生理盐水对照组(P<0.05),抗纤灵组介于正常组和模型组之间,蒙诺组接近于正常组和生理盐水对照组。免疫组化方面:与正常组相比,模型组的a-SMA、CollagenⅠ、CD68的阳性率显著上升(P<0.01),CD45、Vcam-1阳性率上升(P<0.05),抗纤灵组的a-SMA、CD68、Vcam-1的阳性率显著上升(P<0.01),CollagenⅠ、CD45阳性率上升(P<0.05),蒙诺组的CollagenⅠ、CD68、Vcam-1阳性率上升(P<0.05);与生理盐水对照组比较,模型组的a-SMA、CollagenⅠ、CD68、CD45、Vcam-1的阳性率显著上升(P<0.01),抗纤灵组的CD68、CD45、Vcam-1的阳性率显著上升(P<0.01),a-SMA、CollagenⅠ阳性率上升(P<0.05),蒙诺组的CD68阳性率显著上升(P<0.01)、Vcam-1阳性率上升(P<0.05);与模型组相比,抗纤灵组的CD68、Vcam-1的阳性率显著下降(P<0.01),a-SMA、CollagenⅠ、CD45阳性率下降(P<0.05),蒙诺组的a-SMA、CollagenⅠ、CD68、CD45、Vcam-1阳性率显著下降(P<0.01);与蒙诺组比较,抗纤灵组的a-SMA、Vcam-1阳性率上升(P<0.05)Western Blot检测:与正常组相比,模型组的a-SMA、CollagenⅠ、CD68、Vcam-1的灰度值显著上升(P<0.01),CD45的灰度值上升(P<0.05),抗纤灵组的a-SMA、CollagenⅠ、Vcam-1的灰度值显著上升(P<0.01),CD68的灰度值上升(P<0.05),蒙诺组的a-SMA、Vcam-1的灰度值上升(P<0.05);与生理盐水对照组比较,模型组的a-SMA、CollagenⅠ、CD68、Vcam-1的灰度值显著上升(P<0.01),CD45的灰度值上升(P<0.05),抗纤灵组的a-SMA、CollagenⅠ、Vcam-1的灰度值显著上升(P<0.01),CD68的灰度值上升(P<0.05),蒙诺组的a-SMA、Vcam-1的灰度值上升(P<0.05);与模型组相比,抗纤灵组的a-SMA、CD68的灰度值显著下降(P<0.01),CollagenⅠ、Vcam-1的灰度值下降(P<0.05),蒙诺组的a-SMA、CollagenⅠ、CD68、Vcam-1的灰度值显著下降(P<0.01);与蒙诺组比较,抗纤灵组的CollagenⅠ、Vcam-1的灰度值上升(P<0.05)。 结论:1.中医理论:活血祛瘀理论是中医治疗慢性肾脏病及肾纤维化的重要组成部分,在防治慢性肾脏病及肾纤维化方面,“活血化瘀法”又为治疗的关键大法,其疗效及机制值得进一步深入研究。2.实验研究:单侧肾切除及微渗透泵灌注血管紧张素Ⅱ可以成功建立小鼠肾纤维化模型及高血压模型。单侧肾切除及微渗透泵灌注血管紧张素Ⅱ可以激活小鼠肾脏巨噬细胞系统,促进炎症。抗纤灵方可以抑制a-SMA、CollagenⅠ,从而减轻肾组织纤维化。抗纤灵方可能是通过减少CD68、Vcam-1,来抑制巨噬细胞系统,减轻炎症反应,从而延缓肾组织纤维化。蒙诺在本研究中减少蛋白尿,减轻肾纤维化的作用较抗纤灵方更佳。