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以抗病基因中的几个保守序列为依据合成寡核苷酸引物，并形成不同引物组合，通过对小麦抗叶锈近等基因系材料ThLr35及其感病亲本Thatcher基因组DNA进行扩增，同时结合ISSR标记，寻找预期的RGA片段，为克隆小麦抗叶锈基因Lr35目的基因奠定了基础。主要实验结果如下： 1．根据抗病基因NBS-LRR保守序列不同区域设计4个简并引物，形成不同组合。其中，引物组合RAF1：R2、RAF8：R2、RAF8：R5和组合RAF1：R5均能获得有效扩增，而且有一条约630bp条带几乎在各种引物组合中都存在。将根据保守序列GG(V／I)GKTT(P-loop)和GLPLAL(domain5)设计的引物组合RAF1：R2扩增获得的该DNA条带回收，并克隆，测序，BLASTn同源性比较表明，与GeneBank中一211Kb片段(AF326781)同源性达79％，而该211Kb片段为分离获得的450Kb小麦抗叶锈基因Lr10大片段的一部分。 2．根据蛋白激酶类保守序列DVKPEN(domainⅥ)和GTPWYIAPE(subdomainⅧ)设计一对简并引物RAF3：R4扩增，获得不同大小的4条片段，多次重复，表现良好的稳定性；而根据LRR类保守序列设计引物扩增，未获得有效扩增产物，说明小麦基因组中可能含有蛋白激酶类结构，而不含胞外LRR结构。 3．用小麦抗叶锈基因Lr35 ISSR标记回收片段作模板，以不同类保守序列引物进行扩增，NBS-LRR类引物组合RAF1：R2可获得一条597bp特异性条带，将其回收，克隆，测序。根据BLASTn同源性比较，与GeneBank中小麦属BAC克隆(AF459639)和一211Kb双倍体小麦(AF326781)同源性高达90％，可将该片段初步确定为Lr35相关片段。 4．根据RAF1：R2引物扩增产物的测序结果，设计两对特异性引物，摸索不同的PCR反应条件，在ThLr35基因组DNA中最终分别获得约1kb和2kb片段，而在感病亲本Thatcher中未获得相应扩增片段，可能为Lr35相关片段。