酸性a-淀粉酶是目前应用和研究都很多一种酶,酸性α-淀粉酶在酸性条件下能够水解淀粉,因此在发酵、饲料、食品和生物制药等各个领域都广泛的应用。本实验室前期首先筛选得到一株酸性α-淀粉酶高产菌株B-5,其分泌的淀粉酶的最适温度为70℃,最适pH为5.0。然后克隆出酸性α-淀粉酶基因并在大肠杆菌BL21(DE3)成功表达,经分离纯化得到了AMY蛋白,其最适温度为70℃,最适pH为5.0-6.2。根据已报道的α-淀粉酶基因及对本实验中重组的a-淀粉酶基因测序分析发现,本实验中的α-淀粉酶基因包含A,B,C,D,E五个结构域,而多数α-淀粉酶只有A,B,C三个结构域,本实验通过截短突变的方法得到突变体amy-△DE和突变体amy-△E,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,截短酶AMY-△DE蛋白的相对分子量为45kDa,截短酶AMY-△E蛋白的相对分子量为55 kDa.。经分离纯化得到了截短酶AMY-△DE蛋白,其最适温度为70℃,最适pH为5.0～6.2,经分离纯化得到了截短酶AMY-△E蛋白,其最适温度为70℃,最适pH为5.0～6.2。以可溶性淀粉为底物测定截短酶AMY-△DE和截短酶AMY-△E的动力学性质,Km分别为2.422mg/mL; 2.581mg/mL; Vmax分别为107.08uM/min/mg; 115.04uM/min/mg。对生淀粉的吸附性性方面AMY要比AMY-△DE和AMY-△E局,AMY-△DE和AMY-△E的吸附能力非常低,吸附性几乎没有。