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目的:本研究探索了烟酰胺甲基化转移酶（NNMT）在胶质母细胞瘤（GBM）中的生物学功能以及NNMT在胶质母细胞瘤中上调的机制;阐明表皮生长因子受体（EGFR）与NNMT的转录调控关系;研究在EGFR突变体Ⅲ（EGFRvⅢ）表达的胶质母细胞瘤细胞中敲低NNMT产生的生物学功能改变。方法:首先通过 The Cancer Genome Atlas（TCGA）、the Chinese Glioma Genome Atlas（CGGA）和Rembrandt数据库,分析在不同亚型（Subtype）、不同级别（Grade）胶质瘤中 NNMT（Nicotinamide N-Methyltransferase,NNMT）mRNA 表达情况以及NNMT表达高低对患者生存时间的影响。通过查阅HPA数据库（The Human Protein Atlas）,根据免疫组化染色分析NNMT 在 GBM（Glioblastoma multiforme）患者实体肿瘤组织和正常脑组织中的表达情况。通过分析胶质瘤单细胞（Single-Cell RNA Sequencing）数据库,分析NNMT在GBM肿瘤微环境中的亚细胞定位。然后分析NNMT在胶质瘤细胞系和胶质母细胞瘤患者组织样本中的表达情况。在NNMT表达低的细胞过表达NNMT,研究NNMT过表达后对胶质母细胞瘤增殖、侵袭、成瘤能力的影响。通过分析String数据库和ProteomHD数据库分析NNMT共调节蛋白,研究在GBM中NNMT上调的转录调控机制以及转录因子结合位点,通过双荧光素酶实验及CHIP实验予以验证。最后研究在EGFRvⅢ表达的胶质母细胞瘤细胞中敲低NNMT,研究敲低前后细胞增殖、侵袭、克隆成球、原位移植成瘤能力的改变。通过取同一时间点裸鼠颅内原位移植瘤HE染色比较成瘤能力、记录裸鼠生存时间绘制生存曲线比较生存差异。通过对裸鼠原位移植瘤组织免疫组化染色来验证体外实验结果。结果:（1）在TCGA、CGGA、Rembrandt数据库中NNMT在胶质瘤中的表达与级别正相关,在四个病理亚型中间充质亚型和经典亚型表达最高。（2）NNMT在胶质母细胞瘤组织样本和细胞系表达均显著高于正常组织和NHA（Normal Human Astrocyte）。（3）与NNMT表达低的患者相比,NNMT表达高的患者中位生存时间明显缩短。（4）通过分析胶质瘤Single-Cell RNA Sequencing数据库,发现在肿瘤微环境中NNMT主要在胶质瘤细胞和极少量少突胶质细胞中表达。（5）在NNMT表达较低的U87MG和LN229中过表达NNMT,可以促进细胞增殖、侵袭、迁移能力和颅内原位移植瘤生长,缩短荷瘤裸鼠生存时间。（6）通过分析String数据库和ProteomHD数据库,发现NNMT是与EGFR相关性最强的共调节蛋白之一。（7）通过分析TCGA和Rembrandt数据库发现NNMT和EGF有较强的相关性。NNMT和EGFR在胶质母细胞瘤细胞系和胶质母细胞瘤组织样本中表达也有较强的相关性（R2组织蛋白=0.5848,R2GBM细胞系=0.8889）。（8）在 U373-EGFR 细胞中NNMT蛋白和mRNA表达水平与EGF刺激的时间和浓度正相关。（9）胶质母细胞瘤细胞U87MG、LN229、GBM12经EGF刺激,NNMT表达水平显著提高。在U87MG细胞中用慢病毒构建稳定表达EGFRvⅢ的细胞株U87-EGFRvⅢ后,与U87MG细胞相比NNMT蛋白水平明显提高。（10）在表达EGFRvⅢ的细胞株U87-EGFRvⅢ和GSC62中使用EGFR抑制剂或者敲低EGFR可明显抑制NNMT表达。（11）通过高效液相色谱分析显示NNMT过表达、EGFR激活及突变显著提高NNMT酶活性,增加胞质中催化产物浓度,降低细胞甲基化潜能;反之在表达EGFRvⅢ细胞,敲低NNMT可减少胞质中催化产物浓度,提高细胞甲基化潜能。（12）在U373-EGFR和SNB19-EGFR细胞中使用MAPK14信号通路抑制剂SB203580或敲低MAPK14可以显著抑制EGF刺激介导的NNMT上调。（13）在U87-EGFRvⅢ和 GSC62 中使用 siRNA 敲低 MAPK14 可以下调 NNMT 表达。（14）通过双荧光素酶分析,EGF可显著提高NNMT启动子活性,然而SB203580可以显著抑制这一过程。（15）转录因子STAT1和NNMT表达正相关且在NNMT启动子区可能有3个结合位点。（16）MAPK14抑制剂SB203580可抑制EGF诱导STAT1磷酸化,STAT1磷酸化受MAPK14调控。（17）敲低STAT1后在蛋白和mRNA水平抑制EGF或EGFRvⅢ诱导的的NNMT上调。（18）激活STAT1可显著提高NNMT启动子活性,STAT1主要通过与NNMT启动子区结合位点1（-137～-128bp）结合促进NNMT转录。（19）在EGFRvⅢ表达的胶质母细胞瘤细胞中敲低NNMT后,细胞增殖、侵袭、克隆成球能力下降,成瘤性降低,荷瘤鼠生存时间延长。（20）裸鼠原位移植瘤免疫组化显示EGFRvⅢ可上调NNMT表达,NNMT上调后Ki67阳性率升高,Caspase3表达减少;反之在EGFRvⅢ表达的细胞敲低NNMT后Ki67阳性率降低,Caspase3表达增加。结论:一、NNMT在胶质母细胞瘤中过表达,且与患者不良预后相关。二、NNMT过表达促进GBM细胞增殖、侵袭、迁移和成瘤能力。三、EGFR激活或突变后上调NNMT表达和酶活性。四、EGFR上调NNMT依赖MAPK14的激活。五、EGFR通过转录因子STAT1促进NNMT的转录调控。六、在EGFRvⅢ阳性胶质母细胞瘤细胞中靶向敲低NNMT抑制肿瘤恶性进程。