自1986年美国FDA正式批准抗CD3单抗作为临床上治疗肾移植排斥反应的新药上市以来,抗CD3单抗以其具有激活和抑制人T细胞双向功能的特点,在各种器官移植排斥反应、肿瘤及自身免疫性疾病治疗中显示出其广阔的应用前景。但目前临床上应用的CD3单抗主要是鼠源性的,鼠源单抗在人体内应用时产生排斥反应、半衰期短、活性下降、异性蛋白反应等问题,严重限制其在临床治疗中的广泛应用。因此,近年来对于人源性的抗CD3抗体的研究成为热点。大多数抗CD3抗体基因构建后主要选用大肠杆菌和哺乳动物细胞为表达体系,这些表达体系都存在许多缺点。酵母表达体系具备易于操作,遗传背景清楚,生产成本低等原核生物的特点,又具有真核生物的折叠、分泌机制,可以完成真核生物特异的蛋白酶解、折叠、糖基化等翻译后修饰过程,且生长速度快,培养成分简单,能适应工业化生产的需要。本研究选择酵母偏爱密码子同义替换鼠源性抗CD3重链可变区基因(Vh),与人源性重链恒定区(Ch)基因连接,构建完整的人鼠嵌合抗体。将构建的完整的人鼠嵌合表达载体转化X-33毕赤酵母,建立兼具原核系统良好操作性和真核系统后加工性的重组抗CD3毕赤酵母真核表达体系。通过ELISA和MTT的鉴定,筛选出高表达重组抗CD3的酵母菌株。结果表明,本研究正确构建了重组抗CD3抗体毕赤酵母真核表达体系,经甲醇诱导能够分泌具有活性的重组抗CD3抗体蛋白,相对分子量为55kD;重组抗CD3抗体的表达具有累积效应,产量在一段时间内随表达时间延长而增加。本研究为进一步用毕赤酵母作为生物反应器大规模生产抗CD3抗体提供了实验依据。