研究背景：近年来，肺曲霉菌病的发病率逐年上升，而且由于长期口服糖皮质激素患者人数增多，广谱抗生素的应用和重症监护病房的使用增多，非中性粒细胞减少患者的肺部曲霉菌感染发病率也逐年上升，该类患者早期确诊非常困难，不可忽视。　　 肺曲霉菌病的不良预后很大程度与延迟诊断，未能及时有效的使用抗真菌药物有关。传统的诊断曲霉菌感染检查手段具有敏感性低、检查结果迟后、易污染的局限性，使早期诊断肺曲霉菌病存在极大的困难。例如，作为诊断金标准的肺组织活检和组织真菌培养不仅取材不易、耗时较长，而且即便获得了病理标本也可能因为病理变化不典型或病原体阳性发现率不高等缺陷而无法确诊。因此需要探索灵敏、特异、快速的检查手段，帮助早期诊断肺部曲霉菌病。　　 半乳甘露聚糖(Galactomannan，GM)是曲霉菌细胞壁特有的多糖成分，在曲霉菌生长过程中不断释放。现研究已证实：检测血清中半乳甘露聚糖含量即血清GM实验，能有效地提高肺曲菌病诊断的敏感性和特异性，而且具有特异、快速、无创的优点。血清GM实验结果已作为曲霉菌感染的微生物学依据纳入国内外侵袭性曲霉病诊断标准中。但是由于血清GM实验对非中性粒细胞减少的肺曲霉菌病患者存在较高的假阴性率，而且还存在如静脉滴注哌拉西林他唑巴坦等抗生素导致假阳性等诸多因素。因此，血清GM实验结果对肺曲霉菌的临床诊断价值具有一定的局限性。　　 目前已有研究者从非中性粒细胞减少肺曲霉菌病患者的靶器官病变区采集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)直接检测半乳甘露聚糖，结果提示BALF-GM实验敏感性超过血清GM检查。但是BALF检测也存在容易污染，检测结果不稳定，易受灌洗液体容量大小影响等诸多弊端。　　 此外，多聚酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)检测曲霉菌DNA也是研究中用来检测侵袭性曲霉菌病的方法。血PCR检查曲霉菌DNA和血清GM实验相比较，敏感性更高，但是其结果容易交叉污染造成假阳性，检查方法可靠性较差，缺乏标准，因此血PCR检查曲霉菌DNA尚未纳入侵袭性真菌感染诊断指南中[13]。　　 因此探索可以早期、及时、可靠性高、易标准化的诊断肺部曲霉菌感染的方法是当前医学界挑战之一。　　 研究目的：为探索快速、灵敏、可靠、易标准化的用于早期诊断肺曲霉菌病的方法，进一步提高GM实验对肺曲霉菌诊断的及时性和准确性，本研究试图采用标准化的GM实验试剂盒，建立一种直接检测曲霉菌感染病变肺组织标本中半乳甘露聚糖含量的新方法。目前国内外尚未见同类研究报道。　　 研究方法：本研究共纳入24例患者，分为三组：研究组10例(病理确诊曲霉菌感染肺组织)，对照组6例(正常肺组织)，拟诊肺曲霉菌病组8例(曲菌感染可能的病变肺组织)。　　 1、肺组织标本采集：　　 研究组为曲霉菌感染肺组织：标本采集对象为10例手术病理确诊的肺曲霉菌球患者。采集病变肺组织标本在手术取切除肺叶即时，无菌环境下切取已切除肺叶的曲霉菌感染的囊壁肺组织一块，大小0.3*0.3*0.3cm，放入无菌离心管中置于负20度冰箱冻存。　　 对照组为正常肺组织：标本采集对象为6例术前临床诊断为非肺部真菌感染，影像学提示为肺叶局灶性病变，术后病理确诊为病灶局限，分界清楚的非曲菌感染的患者(含肺部恶性肿瘤(4例)，支气管扩张(1例)，肺结核(1例))。取材在手术即时，切除肺叶内远离病灶的正常肺组织(经病理证实)，大小0.3*0.3*0.3cm，放入无菌离心管中置于负20度冰箱冻存。　　 拟诊肺曲霉菌感染组为病变肺组织：标本采集对象为共8例术前疑似曲菌感染患者。手术即时，无菌环境下取切除的病变肺组织，大小0.3*0.3*0.3cm，放入无菌离心管中置于负20度冰箱冻存。　　 2、血清标本采集：　　 以上三组共24例患者均在肺组织标本采集后，同步取材术后次日晨空腹血3ml，取血当日离心，取血清置于负20度冰箱冻存。　　 3、半乳甘露聚糖检测前的肺组织及血清标本预处理：　　 每例肺组织标本在检测GM前，置于常温10分钟，用无菌吸头捣碎肺组织，吸取灭菌无热原水900ul与肺组织混匀，吸取300ul肺组织匀浆液作为GM实验标本。每例血清标本GM试验前置于常温10分钟，吸取300ul血清为GM实验标本。　　 4、检测肺组织及血清标本半乳甘露聚糖含量　　 用同一批次的半乳甘露聚糖检测试剂盒(Platclia() Aspergillus，　　 Bi-Rad，Mames-La-Coquette，France)批量同时检测肺组织及血清的半乳甘露聚糖含量，结果用半乳甘露聚糖指数(Galactomannan Index，GMI)表示。　　 研究结果：　　 1、研究组的曲菌感染肺组织GMI平均值2.74±3.39，范围0.59-7.38。对照组的正常肺组织GMI平均值0.74±0.19，范围O.48-1.04。均大于血清GM实验诊断阳性阈值0.5，需要确定适合肺组织GM实验的阳性诊断阈值。　　 2、根据本次肺组织GM实验研究结果做ROC曲线，确定肺组织GM实验诊断阳性阈值取1.51较恰当，此时肺组织GM实验敏感度60％，特异度100％，阳性预测值100％，阴性预测值60％。　　 3、肺组织GM实验和病理诊断结果相比较，用Kappa一致性检验，P小于0.05，考虑肺组织GM实验诊断结果和病理诊断结果统计学上存在一致性。　　 4、肺组织GM实验和血清GM实验相比较，肺组织GM实验敏感度和特异度更高。　　 研究结论：　　 1、针对不同的标本(血清、肺组织)，半乳甘露聚糖实验应设定不同的诊断阳性阈值，根据本研究结果肺组织GM实验的诊断阈值高于血清GM实验。　　 2、根据ROC曲线，肺组织GM实验诊断阳性阈值为1.51时，肺组织GM实验敏感度：60％，特异度：100％，阳性预测值：100％，阴性预测值：60％。肺组织GM实验和组织病理诊断结果统计学意义上存在一致性。　　 3、本实验中肺组织GM实验敏感度、特异度较血清GM实验更高，提示对可疑肺曲霉菌病患者开展病变肺组织GM实验有助于提高诊断率，该检查可作为肺曲霉菌病患者的辅助检查手段之一。