已知人类fhl1a基因与多种疾病包括心脏病的发生有关,但其调控疾病发生的机制未知。动物模型是研究疾病发生的理想模型。这些模型中,斑马鱼具有体外受精、常年产卵量大、心脏部位透明易于观察胚胎发育的过程等优点,因而成为最常用的脊椎动物模型。基因敲除是研究基因功能的有效技术,近几年CRISPR/Cas9系统基因敲除技术获得快速发展,已成为斑马鱼基因敲除的常规方法。目前,国际上尚未见有关fhl1a基因敲除模型建立的报道。因此,我们采用CRISPR/Cas9系统基因敲除技术建立了fhl1a基因敲除的斑马鱼模型,以用于研究该基因调控心脏发育的分子调控机制。为了建立fhl1a基因敲除模型,我们选取了fhl1a基因的第三号外显子,构建sgRNA表达载体。将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA混合物显微注射到斑马鱼的一细胞时期受精卵中。随后收集部分72h胚胎进行PCR检测和产物直接测序,确定有无突变。为确认突变是否能够稳定遗传,把筛选出具有突变有效性的斑马鱼与野生型杂交,获得F1代斑马鱼进行基因型分析。结果显示F1代鱼获得了不同程度的插入、缺失等突变类型。将F1代突变一致的个体自交得到F2代纯合体。目前已得到缺失8bp的稳定纯合子敲除模型,并且利用原位杂交观察到fhl1a基因敲除的斑马鱼中,心脏环化发生了异常。研究结果证明我们设计的fhl1a基因CRISPR/Cas9敲除系统能在斑马鱼体内有效地形成基因突变,该突变能稳定地遗传到下一代个体,这为进一步研究fhl1a基因在心脏发育中的具体调控机制打下了基础。