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岩藻糖化糖胺聚糖（fucosylated glycosaminoglycan,FG）是目前仅见于海参纲的、含支链糖基的糖胺聚糖（glycosaminoglycan,GAG）衍生物,一般认为FG的主链由D-乙酰氨基半乳糖（D-N-acetyl galactosamine,Gal NAc）和D-葡萄糖醛酸（D-Glucuronic acid,Glc UA）通过β1,3和β1,4糖苷键交替连接形成,L-岩藻糖（L-Fucose,Fuc）通过α1,3糖苷键以侧链形式连接于主链。FG为酸性多糖,其糖基（主要是Gal NAc和Fuc）上存在大量硫酸酯基取代,且硫酸酯基取代形式呈现多样性特点。作为生物大分子,天然FG的NMR谱图信号叠加严重,结构解析困难,因此对于天然FG尤其是复杂侧链取代FG的确切化学结构仍存疑问。为进一步研究含复杂取代类型的天然FG的确切结构,课题组前期对不同海参来源的FG进行初步分析,发现黑乳海参（Holothuria nobilis）来源的FG中可能存在复杂侧链取代。本文以H.nobilis来源的糖胺聚糖（HnFG）为研究对象,系统分析了其理化性质。部分酸水解法分析HnFG的侧链类型,从小分子侧链组分中分离获得单糖Fuc2S4S-ol、Fuc3S4S-ol、Fuc3S-ol、Fuc4S-ol以及二糖D-α-Gal NAc4S6S-（1,2）-L-α-Fuc3S-ol和D-α-Gal NAc4S6S-（1,2）-L-α-Fuc-ol。其中,二糖D-Gal NAc4S6S-α1,2-L-Fuc3S/0S-ol均为首次发现于FG部分酸水解产物,显示HnFG中应当存在特殊的二糖侧链。进一步地,采用糖苷键选择性的β-消除解聚法解聚HnFG,所得解聚产物联用GPC和SAX-HPLC方法分离、纯化,获得寡糖化合物1–16。通过NMR波谱及MS数据解析1–16的化学结构,结果显示:所得寡糖含有复杂多样的侧链结构类型,既存在单糖（Fuc）侧链,也存在二糖（D-Gal NAc-α1,2-L-Fuc）侧链,且涉及多样性的硫酸化取代类型。所述侧链包括L-Fuc3S4S、L-Fuc2S4S、L-Fuc4S、D-Gal NAc4S6S-α1,2-L-Fuc3S,D-Gal NAc4S-α1,2-L-Fuc3S,由此进一步确认了HnFG中特殊二糖侧链(D-Gal NAc4S6S-α1,2-L-Fuc3S/0S-ol)的存在。此外,部分寡糖还原端糖残基（Glc UA-ol）存在O-2位硫酸酯化。根据所得寡糖确切结构解析结果,并结合HnFG过氧化物解聚产物的NMR谱图分析,可见HnFG的确切化学结构为:{4)-[D-Gal NAc R1-（α1,2）-L-Fuc3S-（α1,3）-]-D-Glc UAR2-（β1,3）-D-Gal NAc4S6S-（β1,}m-{4）-[L-Fuc R3-（α1,3）-]-D-Glc UAR2-（β1,3）-D-Gal NAc4S6S-(β1,}n式中,R1为4S或4S6S;R2可独立为2S或0S,R3为2S4S、3S4S、4S或3S。HnFG所含侧链中,约2/3为单糖侧链(包括Fuc2S4S、Fuc3S4S、Fuc4S),约1/3为二糖侧链(包括D-Gal NAc4S6S-α1,2-L-Fuc3S、D-Gal NAc4S-α1,2-L-Fuc3S)。此前研究显示,Thelenata ananas（梅花参）和Acaudina molpadioides（海地瓜）来源的FG中含有二糖侧链（D-Gal S-α1,2-L-Fuc S和D-Gal NAc-α1,2-L-Fuc S）,本研究首次在天然FG中发现新颖二糖侧链D-Gal NAc S-α1,2-L-Fuc3S及O-2位硫酸酯化的Glc UA,进一步拓宽了我们对FG结构多样性与复杂性的认识。基于HnFG的结构特异性,本论文系统对比分析了天然HnFG、d HnFG、及系列寡糖4–8和10–16的抗凝活性,结果显示:HnFG(倍增APTT为3.09±0.11μg/m L;IC50值为20.45±3.24ng/m L)和d HnFG(倍增APTT为16.96±0.05μg/m L;IC50值为52.57±3.48ng/m L)在活化部分凝血活酶时间（APTT）和抑制内源性Xase（i Xase）中表现出强效活性,而低聚糖（degree of polymerization,dp≤6）未表现出明显活性,当dp≥8时表现出活性;将侧链取代类型复杂的天然FG（HnFG,Am FG）与侧链仅由Fuc单糖构成的FG（Hf FG）的抗凝及抗i Xase活性进行比较,结果显示,三者均表现出强效且近似的对APTT的延长活性及对i Xase的抑制活性;在分子量近似的条件下,d HnFG对APTT的延长活性及对i Xase的抑制活性均弱于d Am FG和d Hf FG,且均稍弱于天然FG,表明分子量/链长是FG保持强效抗凝和抗i Xase活性的必须因素,在一定分子量范围内特殊的二糖侧链结构可能减弱FG对APTT的延长活性及对i Xase的抑制活性;通过纯化寡糖的抗凝构效关系分析,同时比较分析在相同聚合度下不同海参来源的含不同二糖侧链的FG寡糖对i Xase抑制活性的影响,发现:在相同聚合度、相同硫酸化取代下二糖侧链的糖基组成对i Xase抑制活性的影响较小,二糖侧链中Gal NAc的硫酸酯化程度对i Xase抑制活性的影响可能与相邻的单糖侧链的取代形式有关。