世界范围内的血液资源紧缺,再加上急救外科、地震的发生等,血液代用品的地位日趋重要。血红蛋白作为血液代用品的主要原料,其活性和纯度与血液代用品的安全性息息相关。理想的血红蛋白原料应该具有较高纯度和浓度且接近红细胞中血红蛋白的天然活性。目前已报道的研究成果中,分别用不同的方法纯化得到了血红蛋白溶液,但纯化后的血红蛋白活性受到了不同程度的损伤。超滤是一种对原料活性损伤较小的膜分离技术手段。基于这项特点,本实验将超滤技术引入到血红蛋白的纯化工作中,以期能纯化出高纯度、和接近天然红细胞中血红蛋白活性的血红蛋白溶液。关于本研究:目的:建立和优化血红蛋白纯化的超滤条件;纯化出人工红细胞研究所需要的高纯度和浓度并具有天然红细胞携氧能力的的猪血红蛋白溶液。方法:首先通过低渗法从猪血红细胞中提取得到血红蛋白溶液,然后采用超滤膜分离的方法纯化猪血红蛋白。根据膜通量与超滤操作压力和料液温度的关系分析确立最佳的超滤纯化条件,并在优化的超滤条件下纯化猪血红蛋白。并应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳法、紫外-可见分光光度法对纯化后的血红蛋白进行了鉴定分析。另外,应用血氧分析仪对超滤后的血红蛋白溶液进行了携氧能力测定和P50测定。结果:在血红蛋白的超滤过程中,膜通量与操作压力基本呈线性关系增加,优化的超滤条件为:操作压力0.05Mpa、料液温度12℃;在此条件下分离纯化的猪血红蛋白,纯度达到了99%以上,浓度较纯化前提高了20倍左右。经血氧分析仪测定,经超滤纯化后的猪血红蛋白P50为20.42,且具有接近天然红细胞的S型携氧曲线。结论:本课题用超滤技术纯化得到的猪血红蛋白,不仅达到了一定的浓度和纯度标准,而且通过携氧能力的检测,证明对血红蛋白的活性损伤较小。本课题超滤纯化得到的血红蛋白为本实验室血液代用品的进一步研究提供了较好的原料。超滤是一种常见的膜分离技术,有着无污染、条件温和、使蛋白变性较少和回收率较高等优点。因此,本课题的超滤纯化血红蛋白的方法将来有望得到发展形成产业化。