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目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最重要的微血管并发症之一,其发病率亦呈上升趋势,因此,积极有效地防治糖尿病肾病意义重大。导师张庚良教授根据健脾补肾活血法进行组方,起到了保护肾脏及延缓糖尿病肾病病程进展的作用。本实验通过腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型的建立,予药物干预,观察健脾补肾活血法对于糖尿病大鼠的一般情况、血糖、血脂、肾功能、肾组织病理形态学、肾重/体重、24h尿微量白蛋白排泄率及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响,探讨健脾补肾活血法对于糖尿病肾病的防治作用。方法:采用清洁级健康雄性SD大鼠,体重230~250g,共58只,普通饲料适应性喂养1周,随机选出10只大鼠作为正常对照组(N),其余48只大鼠用于复制糖尿病模型。按照55mg/kg体重计算,予1%的链脲佐菌素枸橼酸缓冲液(缓冲液浓度为0.1mmol/L,p H值为4.5)单次腹腔注射。72小时后,取大鼠尾静脉血,若血糖值≥16.7mmol/L,大鼠饮水量及尿量均明显增多,则造模成功。将成模的大鼠随机分为模型对照组(M)、健脾补肾活血法组(H)、厄贝沙坦组(W)、健脾补肾活血法联合厄贝沙坦组(H+W),每组各12只。造模成功一周后,对中药组、西药组及联合组按照成人剂量的10倍灌胃给药。中药组予本方每日10ml/kg(相当于生药35.3g/kg)体重灌胃,西药组予厄贝沙坦片混悬液(阿拉伯胶制)每日10 ml/kg(相当于原药2.5mg/ml)体重灌胃,联合组每日上午予同等剂量的中药灌胃,每日下午予同等剂量的厄贝沙坦灌胃,正常对照组和模型组予每日同等体积的生理盐水灌胃。连续灌胃8周。8周末,用代谢笼收集大鼠24h尿液,测24小时尿白蛋白排泄率(UAER),禁食不禁水12小时,予2%的戊巴比妥钠20mg/kg体重腹腔注射进行麻醉,取大鼠左侧股动脉血,用于测大鼠血糖、血脂、肾功能及缺氧诱导因子-1α和血红素加氧酶-1,迅速取出左肾,用于测肾脏肥大指数,观察肾组织病理形态学变化,并测定肾缺氧诱导因子-1α和血红素加氧酶-1的表达情况。结果:1一般情况观察正常对照组的大鼠精神状态良好,活动自如,饮食、饮水以及尿量均正常,体重增长明显,毛色光泽。模型组的大鼠均出现精神状态不佳,活动减少,饮水量及尿量增多,进食增多,体重下降,毛色暗黄无光泽。一部分大鼠在实验过程中,逐渐出现了四肢水肿等糖尿病并发症。其余三个治疗组的大鼠一般情况较介于正常对照组和模型组中间。正常组死亡1只,原因为互相撕咬,模型组、厄贝沙坦组各死亡1只,原因为灌胃不当。此3只大鼠予以剔除。2血糖变化模型组、健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组、联合组大鼠血糖均高于正常组,且有显著性差异(P﹤0.05);健脾补肾活血法组和联合组血糖下降明显,与模型组比较有显著性差异(P﹤0.05);厄贝沙坦组与模型组比较血糖下降不明显,无统计学差异(P﹥0.05)。3血脂变化模型组、健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组、联合组大鼠的血脂均明显升高,与正常组相比有显著性差异(P﹤0.05);健脾补肾活血法组与联合组血脂水平低于模型组,有显著性差异(P﹤0.05);厄贝沙坦组血脂水平与模型组比较无统计学差异(P﹥0.05)。4肾脏肥大指数及24小时尿白蛋白排泄率的变化模型组、健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组、联合组大鼠的肾脏肥大指数及24小时尿白蛋白排泄率均高于正常组,有显著性差异(P﹤0.05);健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组、联合组大鼠的肾脏肥大指数及24小时尿白蛋白排泄率均低于模型组,有显著性差异(P﹤0.05);与健脾补肾活血法组和厄贝沙坦组比较,联合组大鼠的肾脏肥大指数及24小时尿白蛋白排泄率较低,差异显著,有统计学意义(P﹤0.05)。5肾功能的变化模型组、健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组、联合组大鼠的尿素氮、肌酐均高于正常组,有显著性差异(P﹤0.05);与模型组比较,健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组、联合组大鼠的尿素氮、肌酐均较低,有显著性差异(P﹤0.05);与健脾补肾活血法组和厄贝沙坦组相比,联合组大鼠的尿素氮、肌酐较低,有显著性差异(P﹤0.05)。6肾脏组织病理形态学的影响正常对照组可见肾小球结构清晰完整,肾小球体积未见增大,肾小球毛细血管基底膜、系膜、基质未出现异常改变;模型组可见肾组织结构不规则,肾小球体积明显增大,系膜区增宽。三个治疗组与模型组相比,病理形态均有不同程度的减轻,以联合组减轻最为明显。7缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响HIF-1α和HO-1抗原免疫组织化学染色显示为棕黄色。颜色深,且颗粒密集为表达信号强,颜色浅,颗粒疏松为表达信号弱,主要存在于肾组织中肾小管上皮细胞,少量存在于肾小球。正常组大鼠有很弱的表达。模型组显示强阳性表达,与正常组相比差异有统计学意义(P﹤0.05)。与模型组比较,健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组和联合组均有较低的表达,有统计学意义(P﹤0.05),其中联合组更为明显(P﹤0.05)。用ELISA法检测血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血红素加氧酶-1(HO-1)。模型组、健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组、联合组大鼠的HIF-1α和HO-1均高于正常组,有显著性差异(P﹤0.05);与模型组比较,健脾补肾活血法组、厄贝沙坦组、联合组大鼠的HIF-1α和HO-1均较低,有显著性差异(P﹤0.05);与健脾补肾活血法组和厄贝沙坦组相比,联合组大鼠的HIF-1α和HO-1较低,有显著性差异(P﹤0.05)。且HIF-1α和HO-1经过Pearson直线相关分析显示,相关系数r为0.533,经检验,P﹤0.05,二者呈正相关。结论:1糖尿病大鼠表现为血糖、尿素氮、肌酐及血脂水平的升高,尿蛋白增多,肾小球体积增大,毛细血管基底膜增厚,基质增多,HIF-1α和HO-1呈高表达。2以健脾补肾活血法组方可降低血糖,减少尿蛋白,降低尿素氮、肌酐及血脂,抑制HIF-1α和HO-1的表达,表明以健脾补肾活血法组方可以调节糖脂代谢,改善胰岛抵抗,改善氧化应激,保护肾脏,从而达到防治糖尿病肾病的目的,为中药延缓糖尿病肾病病程进展提供了新方向。