蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床Cnidium monnieri (L.) Cusson的果实,为中医临床常用中药之一,具有湿肾壮阳,燥湿,杀虫之功效。蛇床子广泛分布于我国大部分地区,因地理位置和生态环境的不同,其种内的化学成分发生了较大的变异。目前普遍认为香豆素类化合物是蛇床子的主要活性成分,为了综合开发利用药用植物资源,寻找蛇床子的新药用资源,本课题以中药蛇床子为研究对象,建立了现代色谱对其进行香豆素成分表征的方法。采用反相高效液相色谱法、细径柱高效液相色谱法、β-环糊精修饰胶束电动毛细管色谱法、加压毛细管电色谱法为研究技术,对蛇床子药材中的香豆素类化合物进行了指纹图谱和质量控制的表征,研究成果可为蛇床子药材质量控制的现代化研究提供研究方法的模板和技术平台。1. RP-HPLC测测定蛇蛇蛇蛇床床床床子子子药药材中中中中香香香香豆豆豆豆素素素成成分采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对12批不同来源蛇床子药材特征成分进行分离分析,建立评价其质量的特征成分谱。采用十八烷基硅烷键合硅胶柱DiamonsilTM C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-10 mM醋酸铵水溶液(用醋酸调节pH至4.0)(体积比为50:50);紫外检测波长320 nm。以安定为内标,佛手柑内酯、欧前胡素、2’-乙酰白芷素、欧山芹素、O-乙酰哥伦比亚内酯的回归方程分别为Y=0.0279X-0.0203 , Y=0.0197X+0.041 ,Y=0.0251X+0.032,Y=0.0368X+0.0252,Y=0.0325X+0.0228,线性范围4μg/mL～100μg/ mL;蛇床子素的回归方程Y=0.0472X-0.0539,线性范围10μg/mL～300μg/mL;平均回收率和RSD分别为98.1%、96.2%、96.4%、101.9%、102.4%、98.4%和4.58%、5.73%、3.58%、4.89%、5.85%、4.51%。本方法简便快速,回收率及重现性良好,适用于蛇床子药材中香豆素类化合物的优化分离及佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素、2’-乙酰白芷素、欧山芹素和O-乙酰哥伦比亚内酯的定量分析,并为蛇床子药材的质量控制与道地性研究提供了简便的方法。2.细径柱RP-HHPP LC测定蛇床子药材中香豆素成分在前一章的基础之上,将常规色谱柱改为细内径色谱柱,建立了一种快速,简便,重现性高的细径柱高效液相色谱方法,同时测定12批不同来源的蛇床子药材中香豆素类化合物佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素、2’-乙酰白芷素、欧山芹素和O-乙酰哥伦比亚内酯的含量。采用Phenomenex? C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,5μm);流动相:乙腈-10 mM醋酸铵水溶液(用醋酸调节pH至4.0)(体积比为50:50);流速0.3 mL/min;紫外检测波长320 nm;进样量为20μL。实验结果表明,方法灵敏准确,重现性高,适于含量测定。3.胶束电动毛细管色谱测定蛇床子药材中香豆素类成分建立了β-环糊精修饰胶束电动毛细管色谱分离和测定蛇床子药材中香豆素类化合物的方法。分别对内标选择、pH、缓冲液浓度、缓冲液的组成及浓度等影响因素做了系统的研究。使用未涂布熔融石英毛细管柱50.2 cm×75μm i.d.,有效长度40 cm,运行缓冲液为40 mM硼砂缓冲液-25 mM SDS-10 mM羟丙基环糊精(pH 9.5)和20%的甲醇,柱温为25℃,运行电压为30 kV(+)→(-),压力进样1 psi×5 s,检测波长为210 nm。同时测定了不同购买地蛇床子药材中六种香豆素成分佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素、2’-乙酰白芷素、欧山芹素和O-乙酰哥伦比亚内酯的含量。此结果对蛇床子药材的分离分析在微分离领域的应用具有一定提示作用,为生产过程的质量控制提供了有利依据。4.加压毛细管电色谱分离测定蛇床子药材中香豆素成分建立加压毛细管电色谱(pCEC)对蛇床子药材进行质量控制的微柱分析方法。首先,基于加压毛细管电色谱仪的分离核心为毛细管色谱柱,对常规两端烧结塞子的填充柱进行了改进,采用进口端为开管柱而出口端为整体柱塞子的毛细管色谱填充柱,并对其制备法的重复性与可行性进行了探讨和研究。其次,在采用自制新型的毛细管色谱柱上对蛇床子中香豆素类成分进行了分离和包括乙腈比例,缓冲液离子强度,pH值和运行电压的条件优化,优化后的电色谱条件可在15 min之内分离蛇床子药材中六种香豆素类化合物(蛇床子素、佛手柑内酯、欧前胡素、欧山芹素、2’-乙酰白芷素、O-哥伦比亚内酯)并对方法的线性、精密度、稳定性、加样回收率等进行了较为全面的考察。实验结果表明,方法灵敏准确,重现性好,适于含量测定。该结果对加压毛细管电色谱法在中药分离分析中作为一种有利的分析技术的研究提供了可靠依据。