[目的]建立慢性应激老年大鼠抑郁模型,评估老年抑郁大鼠海马血管新生的变化及其相关的分子机制,研究抗抑郁药物文拉法辛的干预作用。[方法]1.SPF级雄性老年SD大鼠(20月龄)共72只。根据随机数字表将大鼠随机分为模型组、文拉法辛组、生理盐水组、对照组各18只。模型组、文拉法辛组、生理盐水组均给予经改良的慢性不可预测的温和应激结合孤养共5w,文拉法辛组于应激后第3w末开始同时给予文拉法辛(5mg.kg-1.d-1)腹腔注射持续14d；生理盐水组于应激后第3w末开始同时给予生理盐水腹腔注射持续14d；对照组不给予任何处理,3只／笼正常喂养共5w。采用敞箱实验和蔗糖消耗实验评估大鼠抑郁模型建立情况,并观察老年抑郁大鼠及文拉法辛治疗后的行为学特征。2.对上述大鼠标本,采用HE染色观察各组大鼠海马的形态学变化。应用免疫组织化学技术测定各组大鼠海马的微血管密度(microvessels density, MVD)以评估老年抑郁大鼠及文拉法辛干预后的海马血管新生的变化。3.采用免疫组织化学技术测定各组大鼠海马血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、血管生成素1(angiopoietin1, ANG1)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的蛋白表达变化。采用免疫印迹(western blot)和逆转录聚合酶链反应(reverse transcript polymerase chain reaction, RT-PCR)技术测定各组大鼠海马VEGF及其受体血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor2, VEGFR2)、ANG1及其受体内皮细胞特异性酪氨酸受体2(tyrosine kinase with immunoglobulin and epide growth factor homology domain2, TIE2)、bFGF及其受体成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor1, FGFR1)的蛋白及mRNA表达水平。以评估老年抑郁大鼠及文拉法辛干预后的海马促血管新生因子表达的变化。4.采用Western Blot和RT-PCR测定各组大鼠海马的磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B (protein kinase B, Akt)、Janus蛋白酪氨酸激酶1(janus protein tyrosine kinase1, JAK1)、信号转录与转导活化因子3(signal transducer and activator of transcription3, STAT3)的蛋白及mRNA表达水平。并采用Western Blot测定磷酸化-Akt (phospho-Akt, p-Akt)蛋白表达水平。以评估老年抑郁大鼠及文拉法辛干预后的与海马血管新生作用相关的细胞内信号转导分子的变化。5.采用多元线性回归分析,评估MVD与抑郁行为学指标敞箱实验的水平运动得分、垂直运动得分、清洁时间和蔗糖消耗实验的蔗糖消耗量之间的关系。采用Bivariate相关分析,评估VEGF蛋白、ANG1蛋白、bFGF蛋白相互之间的关系；并评估MVD与VEGF蛋白、MVD与ANG1蛋白、MVD与bFGF蛋白之间的关系。采用一元线性回归分析,评估MVD与VEGF蛋白、MVD与bFGF蛋白之间的关系。[结果]1.敞箱实验和蔗糖消耗实验显示模型组、文拉法辛组和生理盐水组抑郁模型均建立成功。敞箱实验结果：组内比较：模型组、文拉法辛组、生理盐水组于应激后3w、应激后5w分别与同组应激前1d比较,模型组和生理盐水组应激后5w与同组应激后3w比较,水平运动得分、垂直运动得分均降低(P均<0.05),清洁时间缩短(P<0.05)。组间比较：应激后5w,与对照组比较,文拉法辛组的水平运动得分、垂直运动得分降低(P<0.05),清洁时间缩短(P<0.05)；模型组和生理盐水组的水平运动得分、垂直运动得分明显降低(P<0.01),清洁时间显著缩短(P<0.01)；与生理盐水组比较,文拉法辛组垂直运动得分增加(P<0.05)。蔗糖消耗实验结果：组内比较：模型组和生理盐水组应激后5w分别与同组应激前1d、同组应激后3w比较,蔗糖消耗、蔗糖偏爱减少(P均<0.05)。组间比较：应激后5w,与对照组比较,模型组和生理盐水组的蔗糖消耗显著减少(P<0.01)；与生理盐水组比较,文拉法辛组的蔗糖消耗增加(P<0.05)。2.HE染色显示：对照组海马锥体细胞层厚,排列整齐、紧密,毛细血管数量正常；模型组和生理盐水组海马锥体细胞层变薄,细胞间隙增大,排列紊乱、疏松,毛细血管数量减少；文拉法辛组海马锥体细胞层薄,但细胞排列整齐、紧密,毛细血管数量明显增多,管腔不规则。免疫组织化学染色结果显示：与对照组比较,模型组和生理盐水组海马微血管密度降低(P<0.05)；与生理盐水组比较,文拉法辛组海马微血管密度增加(P<0.05)。3.与对照组比较,模型组和生理盐水组海马VEGF蛋白及VEGFR2蛋白、VEGFmRNA及VEGFR2mRNA表达降低(P<0.05)：与生理盐水组比较,文拉法辛组海马VEGF蛋白及VEGFR2蛋白、VEGFmRNA及VEGFR2mRNA表达增加(P<0.05)。4.与对照组比较,模型组和生理盐水组海马ANG1蛋白及TIE2蛋白、ANG1mRNA及TIE2mRNA表达增加(P<0.05)；与生理盐水组比较,文拉法辛组海马ANG1蛋白及TIE2蛋白、ANG1mRNA及TIE2mRNA表达增加(P<0.05)。5.与对照组比较,模型组和生理盐水组海马bFGF蛋白及FGFR1蛋白、bFGFmRNA及FGFR1mRNA表达降低(P<0.05)；与生理盐水组比较,文拉法辛组海马bFGF蛋白及FGFR1蛋白、bFGFmRNA及FGFR1mRNA表达明显增加(P<0.01)。6.与对照组比较,模型组和生理盐水组海马P13K蛋白及Akt蛋白、p-Akt蛋白、PI3KmRNA及AktmRNA表达均下降(P<0.05)；与生理盐水组比较,文拉法辛组海马P13K蛋白及Akt蛋白、p-Akt蛋白、PI3KmRNA及AktmRNA表达明显增加(P<0.01)。7.四组海马JAK1蛋白及STAT3蛋白、JAK1mRNA及STAT3mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。8.在MVD与行为学结果的回归分析中,敞箱实验的垂直运动得分系数有统计学意义(P<0.05),回归方程为MVD=5.056+0.580垂直运动得分。在VEGF蛋白、ANG1蛋白、bFGF蛋白的相关分析中,VEGF蛋白与ANG1蛋白、VEGF蛋白与bFGF蛋白均显著相关(r分别为0.573、0.742,P分别为0.003、0.000)。在MVD与VEGF蛋白的回归分析中,VEGF蛋白系数有显著统计学意义(P<0.01),回归方程为MVD=3.391+11.507VEGF。在MVD与bFGF蛋白的回归分析中,bFGF蛋白系数有显著统计学意义(P<0.01),回归方程MVD=3.047+10.884bFGF。[结论]1.本实验成功建立了老年大鼠抑郁模型。老年抑郁大鼠有其抑郁样症状特征：精神运动性迟滞症状突出,并随应激时间延长而加重；兴趣下降症状较晚才出现。相同剂量的文拉法辛针对不同症状疗效存有差异：可遏制活动迟滞症状的加重,但不能恢复到正常水平；可防治兴趣下降症状出现。2.慢性应激老年抑郁大鼠的海马微血管密度减少,血管新生可能受抑。文拉法辛干预后海马微血管密度增加,对海马血管新生可能有促进作用。老年抑郁大鼠的海马微血管密度与老年大鼠的抑郁样症状有关,提示老年抑郁障碍可能与血管损伤有关。3.经过持续5周的经改良的慢性不可预测的温和应激结合孤养,老年抑郁大鼠海马VEGF及受体VEGFR2、ANG1及受体TIE2、bFGF及受体FGFR1的蛋白及mRNA表达可发生改变。经文拉法辛14天抗抑郁治疗可促进老年抑郁大鼠海马VEGF及受体VEGFR2、ANG1及受体TIE2、bFGF及受体FGFR1的蛋白及mRNA的表达。海马VEGF蛋白与ANG1蛋白、VEGF蛋白与bFGF蛋白有关。海马微血管密度与VEGF蛋白有关,海马微血管密度与bFGF蛋白有关。提示VEGF、ANG1、bFGF在血管新生的分子机制中可能参与了老年抑郁障碍的发病和文拉法辛的抗抑郁作用。4.在与血管新生作用相关的细胞内信号通路中,慢性应激老年抑郁大鼠的海马PI3K/Akt信号通路可能受到影响,文拉法辛可促进PI3K/Akt信号通路的活化。JAK1/STAT3信号通路未发生明显变化。提示PI3K/Akt信号通路在血管新生的分子机制中可能参与了老年抑郁障碍的发病及文拉法辛的抗抑郁作用。