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随着病原菌耐药性的日趋严重，新型抗生素及其类似物的研发迫在眉睫。抗菌肽因为具有独特的抗菌机制已成为最具有潜力的抗生素替代品之一，如多黏菌素B和短杆菌素，然而较短的半衰期已成为抗菌肽临床应用的主要障碍，因此延长抗菌肽的半衰期已成为新型抗菌肽的研发重点。BM16R是以抗菌肽BuforinⅡ的α螺旋部分和本实验室前期获得的MDAP-2抗菌肽α螺旋部分杂合得到的BM16为母肽，通过氨基酸替换得到的抑菌活性较好的杂合抗菌肽。本研究以杂合抗菌肽BM16R为母肽，通过GGGGS连接序列将BM16R的C端与人血清白蛋白亲和序列ABD035的N端连接到一起，得到的融合肽命名为BM16R-L。将BM16R-L的基因进行串联，中间加入盐酸羟胺裂解位点(NG)，连接到表达载体pET-28a上，构建重组表达质粒pET-28a-2(BM16R-L)，将其转入BL21感受态细胞中进行表达，对表达产物纯化，获得了具有抑菌活性的BM16R-L融合蛋白。利用高效液相色谱法(HPLC)测定了BM16R-L在大鼠体内和体外的半衰期。为了获得活性较好的融合蛋白BM16R-L，本研究选用昆虫杆状病毒表达系统对BM16R-L进行表达，将串联基因连接到pFastBacHTA穿梭载体上，构建出重组病毒Bacmid-2(BM16R-L)。转染到Sf9昆虫细胞中，成功获得了具有较好抑菌活性的BM16R-L融合蛋白。为抗菌肽的临床前研究奠定了基础。主要实验结果如下：
1.BM16R-L的设计、原核表达与活性测定
将抗菌肽BM16R与人血清白蛋白亲和序列ABD035相连，获得融合肽BM16R-L，通过原核表达纯化出BM16R-L。体外抑菌活性测定BM16R-L对革兰氏阴性菌具有较好的抑制作用，MIC值为16-32μg/mL。
2.BM16R-L体内和体外半衰期测定
利用高效液相色谱法测定了BM16R和BM16R-L在大鼠体内的半衰期分别为0.42±0.03min和6.4±1.90min，在血浆中半衰期分别为61.10±3.43min和632.44±39.21min，成功延长BM16R的半衰期。
3.BM16R-L在Sf9昆虫细胞中表达
构建了Bacmid-2(BM16R-L)重组杆状病毒，并转染到Sf9细胞中，表达出2(BM16R-L)蛋白，Ni2+纯化后经羟胺裂解，获得了对革兰氏阴性菌具有较好抑菌活性的BM16R-L。
1.BM16R-L的设计、原核表达与活性测定
将抗菌肽BM16R与人血清白蛋白亲和序列ABD035相连，获得融合肽BM16R-L，通过原核表达纯化出BM16R-L。体外抑菌活性测定BM16R-L对革兰氏阴性菌具有较好的抑制作用，MIC值为16-32μg/mL。
2.BM16R-L体内和体外半衰期测定
利用高效液相色谱法测定了BM16R和BM16R-L在大鼠体内的半衰期分别为0.42±0.03min和6.4±1.90min，在血浆中半衰期分别为61.10±3.43min和632.44±39.21min，成功延长BM16R的半衰期。
3.BM16R-L在Sf9昆虫细胞中表达
构建了Bacmid-2(BM16R-L)重组杆状病毒，并转染到Sf9细胞中，表达出2(BM16R-L)蛋白，Ni2+纯化后经羟胺裂解，获得了对革兰氏阴性菌具有较好抑菌活性的BM16R-L。