论文部分内容阅读
心脑血管疾病是一种严重威胁人类健康的常见病，发病率和死亡率居各类疾病前列，至今仍是难以攻克的严重危害人类健康和生命的疾病之一。随着人们生活质量的提高，高脂血症是诱发动脉粥样硬化、血栓等心脑血管疾病最主要的原因之一。血浆低密度脂蛋白（Low density lipoprotein,LDL）是人血浆中含量最多的一种血浆脂蛋白，负责在血液内运载脂肪酸分子至全身各处供细胞使用。LDL可被活性氧（Reactive oxygen species,ROS）氧化为ox-LDL(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)。LDL和ox-LDL能与血小板表面特异的受体结合，激活胞内信号通路，从而使血小板活化。虽已有报道指出，高脂血症LDL含量显著增加时，伴随着血小板反应性增加、血栓增大，但是高脂血症血栓形成的机制仍不完全清楚，尤其是高脂血症血栓形成过程中血小板活化的特征尚无报道。 目的：本课题利用瞬时数码成像显微镜系统结合激光损伤诱导的提睾肌血栓模型和机械损伤诱导的腹主动脉血栓模型，旨在探讨高脂血症血栓中血小板异质性活化的特征，并且解析LDL参与血栓的动态过程。 方法： 1.C57BL/6J背景野生型（Wide type,以下简写为WT）小鼠和载脂蛋白E（ApoE）敲除小鼠（以下简写为ApoE-/-小鼠）喂食高脂饲料（High-fat diet,以下简写为HFD），建立高脂血症小鼠模型，喂食普通饲料（Chew diet，以下简写为CD）小鼠作对照。 2.C57BL/6J背景WT和ApoE-/-小鼠喂食HFD2～3周，激光损伤诱导提睾肌动脉血栓，通过瞬时数码成像显微镜系统，对比喂食CD和HFD小鼠的血栓大小、血栓中血小板的活化程度的变化，分析高脂血症状态下血栓形成的特征。 3.WT小鼠和ApoE-/-小鼠喂食HFD1周，2周，3周，4周，通过眼眶后静脉丛取血，检测高脂血症发展过程中血小板数和血脂含量的变化趋势。 4.机械损伤诱导WT小鼠腹主动脉血栓，进行免疫染色分析LDL-C和ox-LDL参与血栓形成的情况。 5.WT小鼠颈静脉注射细胞膜红色荧光探针标记的LDL（Dil-LDL），激光损伤诱导提睾肌动脉血栓，解析LDL参与血栓的动态过程。 结果： 1.喂食HFD的ApoE-/-小鼠提睾肌血栓体积显著大于喂食CD的小鼠，且血栓中血小板活化程度增加(P<0.05)。 2.喂食HFD的ApoE-/-小鼠血栓脱落过程中拖尾血栓的比例较喂食CD的ApoE-/-小鼠增加1.5倍。 3.喂食HFD的ApoE-/-小鼠在高脂饮食第3周，血小板数目较喂食CD的ApoE-/-小鼠减少了40％(P<0.05)。 4.与喂食CD相比，喂食HFD的ApoE-/-小鼠LDL-C含量显著增加(P<0.05)，在第3周时，增加了1.5倍(P<0.05)。 5.小鼠大动脉血栓存在血小板异质性活化。 6.LDL和ox-LDL参与血栓形成，LDL与血栓中轻微活化的血小板结合。 结论：我们的小鼠血栓模型表明，与喂食CD的小鼠相比，高脂血症小鼠的提睾肌动脉激光损伤后形成的血栓体积显著增加，血栓“核区域”和“壳区域”血小板的活化程度升高，血栓脱落受限。并且血小板反应性上升，LDL和ox-LDL参与血栓构成，LDL与血栓中轻微活化的血小板结合。我们首次证明小鼠的大血管血栓也有血小板异质性活化的特点。该研究进一步阐明了高脂血症影响血栓形成的机制，为未来动脉粥样硬化血栓形成的防治提供了理论依据。