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百日咳毒素(Pertussis toxin,PTX)作为一种免疫佐剂,被广泛应用于EAE动物模型的诱导,然而其作用的靶细胞及其分子机制却一直不清楚。脂多糖LPS是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分。LPS与PTX在诱导树突状细胞(Dendriticcells,DCs)成熟和在体外的佐剂功能方面有许多的相似性,但是二者在体内的免疫佐剂作用的异同却鲜有研究。多发性硬化症(Multiple Sclerosis,MS)是一种常见的由Th1/Th17细胞介导以中枢神经系统(Central Nervous System, CNS)脱髓鞘为特征的自身免疫性疾病。而实验性自身免疫性脑脊髓炎(ExperimentalAutoimmune Encephalomyelitis,EAE)是MS在小鼠中的自身免疫病模型。我们在EAE的诱导过程中发现, PTX刺激过的DCs(PTX-DCs)能够代替PTX作为佐剂诱导疾病的发生,说明DCs很可能是佐剂PTX诱导EAE的潜在靶点细胞。然而,LPS或LPS刺激过的DCs(LPS-DCs)都不能诱导疾病发生。我们猜想,不同佐剂(PTX和LPS)通过诱导不同状态的DCs从而调节T细胞的产生不同的免疫应答反应。 一方面,与PTX比较,我们试图解答在体内LPS为什么不能作为佐剂诱导EAE疾病。我们发现,PTX-DCs和LPS-DCs都能诱导产生大量的炎症因子(IL-1β,IL-6,IL-12等),但LPS-DCs也能诱导产生大量的抑制性因子IL-10,而PTX-DC几乎不能诱导IL-10产生。利用来源于IL-10基因敲除小鼠的DCs(IL-10-/--DCs),我们发现LPS-DCs产生IL-10直接或间接抑制了Th1/Th17的分化和增殖。最后,我们发现LPS刺激过的IL-10-/--DCs(LPS-IL-10-/--DCs)可以用来作为佐剂诱导EAE疫病,而PTX刺激过的过转了IL-10的DCs(PTX-IL-10-DCs)却显著抑制了疾病的发生。我们的研究表明,在体内,佐剂的选择性作用比作用强度更重要。 另一方面,我们试图在DCs中挖掘一系列能够调控致病性自身反应性T细胞免疫应答进而影响EAE疾病的新分子。我们首先对疾病模型体内淋巴结DCs的芯片作了对比分析(PBS-lym-DCs和PTX-lym-DCs),并对相关领域的文献作了综述,综合挑选出了一系列在PTX-lym-DCs中高表达的候选分子,并通过荧光定量PCR在体外进行了验证。NF-κB和ISRE荧光报告基因结果显示第一批6个候选分子具有强烈的促进炎症反应的能力,符合我们的预期。这些结果为后续筛选提供了基础和依据,具有重要的意义。 我们的研究将为EAE疾病的发生机制提供新的思路,也为MS的治疗提供潜在的新靶点。