环境雌激素(environmentalestrogen)对人类和野生动物的有害效应已引起了人们的广泛关注。近年来，许多专家开始着手建立潜在环境雌激素的筛选方法。目前，已有多种筛选方法得以应用。建立在鱼类的卵黄蛋白原(vitellogenin，Vtg)水平的筛选方法，因其特异性，已受到高度重视。剑尾鱼(Xiphophorushelleri)是一种热带淡水小型鱼类，由于体型小、繁殖周期短，易饲养，可在实验室条件下进行纯化培育；又因其对某些有机物或重金属敏感，已被推荐作为生态毒理学测试的理想实验动物，但是迄今为止以它作为实验动物检测环境雌激素的研究尚未报道。本研究目的在于：①通过人工诱导探讨卵黄蛋白原(vitellogenin，Vtg)的产生，由此得到剑尾鱼纯化的Vtg；②从剑尾鱼卵巢提纯卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin，Lv)，以Lv作为抗原制备Lv抗血清；③Westem——bloting检测Lv和Vtg是否具有免疫原性；④建立酶联免疫吸附(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)方法，检测剑尾鱼雄性个体体内的Vtg含量，为实用检测方法的建立奠定基础。 本实验以17β-雌二醇(17β-estradiol)诱导的剑尾鱼雄性个体的整体匀浆液和雌鱼个体卵黄生成期的卵巢组织为材料，采用SephacrylS-300凝胶过滤层析柱和QSepharose阴离子交换柱从剑尾鱼体内提纯了Vtg和Lv。已确定被纯化的剑尾鱼Vtg在Native-PAGE(4-7.5％)电泳中分子量为540kD左右。Lv在Native-.PAGE(4-7.5％)电泳中分子量为530kD左右。Native——PAGE(4-7.5％)电泳后的凝胶分别利用苏丹黑B进行脂蛋白染色、高碘酸-Shiff试剂进行糖蛋白染色和甲基绿进行磷蛋白染色，结果表明，剑尾鱼Vtg和Lv是一种富含糖、脂、磷的蛋白。 用纯化的剑尾鱼Lv免疫3只大白鼠得到鼠源多克隆抗血清。用免疫双扩散的方法测定Lv抗血清的效价分别为1：8，1：16，1：32。Western-bolting检测显示抗血清的特异性较好，还发现Vtg和Lv之间存在明显的免疫交叉反应性，表明两者具有相同的免疫原性。通过免疫双扩散还发现，在通常条件下Lv抗血清表现出明显的雌性特异性和种的特异性。 以Lv抗血清作为抗体，纯化的Vtg作为抗原建立了间接酶联免疫吸附反应(ELISA)方法来检测雄鱼整体匀浆液中Vtg含量。该方法的检测工作范围为32.5-2000ng/mL，抗Lv血清的最佳释度为1：5000，在此范围内，标准曲线具有良好的线性和重复性。可直接在1块或在不同的酶标板上准确地比较样品。结果表明，可利用ELISA法测定雄鱼血清中Vtg的水平，进而开展对环境中环境雌激素的筛选。 检测结果显示，50μg/LE2诱导21d的雄性剑尾鱼有明显的Vtg产生，10μg/LE2诱导剑尾鱼亦有Vtg产生，但较50μg/LE2诱导组低，1μg/LE2诱导组及对照组剑尾鱼没有Vtg产生，所测OD值P/N小于2.1。500ng/L、100ng/L、40ng/L三个不同浓度PCBs进行诱导的雄性剑尾鱼没有Vtg产生，所测OD值P/N小于2.1。