铜陵白姜及6-姜酚对酒精性肝损伤的保护作用

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生姜是姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鲜根茎,是一种较为常见中药,多用于风寒感冒,胃寒呕吐,寒痰咳嗽,鱼蟹中毒;它同时也是传统的调味品。6-姜酚(6-gingerol)是生姜的主要活性成分,现代药理研究证明6-姜酚具有多种生物学活性,如抗炎、保肝利胆以及抗肿瘤等。研究还发现6-姜酚对非酒精诱导肝损伤小鼠具有保护作用。铜陵白姜是稀有的优良生姜地方品种,“铜陵八宝”之一,栽培历史悠久,具有十分丰富的营养成分。本课题首先探讨6-姜酚对酒精性肝损伤小鼠是否有保护作用;在6-姜酚对酒精性肝损伤小鼠有保护作用的基础上,进一步研究铜陵白姜对酒精性肝损伤小鼠的保护作用,本课题进行如下实验:1.6-姜酚对酒精性肝损伤小鼠的保护作用(1)本实验采用高斌模型法构建小鼠酒精性肝损伤模型,采用灌胃的方式对小鼠进行给药处理。动物分组如下:正常组(Vehicle)、酒精组(Et OH)、6-姜酚(6-gingerol)高剂量组(100 mg/kg)、6-姜酚(6-gingerol)中剂量组(50mg/kg)、6-姜酚(6-gingerol)低剂量组(25 mg/kg)和水飞蓟素组(Silymarin,100mg/kg)。通过肝组织病理学(HE染色、油红O染色)、血清学(AST、ALT、T-CHO、TG含量测定)、ELISA方法检测小鼠酒精性肝损伤造模完成后的肝损伤情况及促炎因子的表达水平。采用免疫组化法检测小鼠肝脏中TLR4表达水平,蛋白质免疫印迹法检测TLR4和炎症因子的表达水平。(2)通过肠组织病理学(HE染色)检测小鼠酒精性肝损伤造模成后小肠组织损伤情况,免疫组化法检测小鼠小肠中TLR4表达水平,蛋白质免疫印迹法检测小肠组织中TLR4、紧密连接蛋白(Zonula Occludens-1;ZO-1)、咬合蛋白(Occlaudin)和闭合蛋白1(claudin-1)表达水平,采取16S r RNA测序方法对小鼠粪便中微生物群的分类学变化进行检测。2.铜陵白姜对酒精性肝损伤小鼠的保护作用本实验采用高斌模型法(NIAAA)构建小鼠酒精性肝损伤模型,采用灌胃的方式对小鼠进行给药处理。动物分组如下:分别为正常组(Vehicle)、酒精组(Et OH)、铜陵白姜(Tongling white ginger,GN)低剂量组(0.5 g/kg)、铜陵白姜(Tongling white ginger,GN)中剂量组(1 g/kg)、铜陵白姜(Tongling white ginger,GN)高剂量组(1.5 g/kg)和水飞蓟素组(Silymarin,0.1 g/kg)。通过肝组织病理学(HE染色、油红O染色)、血清学(AST、ALT、T-CHO、TG含量测定)、ELISA方法检测小鼠酒精性肝损伤造模完成后的肝损伤情况及促炎因子的表达水平。结果:1.(1)6-姜酚对酒精性肝损伤具有保护作用:HE染色、油红O染色、AST、ALT、T-CHO、TG含量测定,提示6-姜酚能显著改善酒精造成的肝损伤,同时ELISA检测结果指出6-姜酚能显著降低酒精导致的IL-1β、IL-6和TNF-α的高表达。免疫组化显示6-姜酚可以降低酒精导致的TLR4高表达。蛋白质免疫印迹结果显示6-姜酚能够显著改善酒精导致的TLR4和炎症因子的不正常表达。(2)肠组织病理学(HE染色)、免疫组化、蛋白质免疫印迹结果提示6-姜酚可以改善酒精导致的小鼠肠组织的损伤,16S r RNA测序结果显示6-姜酚明显逆转了酒精导致的粪便中微生物分类学的改变。2.铜陵白姜对酒精性肝损伤具有保护作用:HE染色、油红O染色、AST、ALT、T-CHO、TG含量测定,提示铜陵白姜能显著改善酒精造成的肝损伤,同时ELISA检测结果指出铜陵白姜能显著降低酒精导致的IL-1β、IL-6和TNF-α的高表达。结论:1.6-姜酚对酒精性肝损伤小鼠具有保护作用,6-姜酚的保护作用可能是通过下调TLR4蛋白的表达而抑制炎症信号通路的转导,从而有效减轻酒精诱导的肝损伤。6-姜酚通过减轻酒精导致的肠道微生态变化抑制肠源性因素对肝脏造成的二次打击,间接减轻酒精导致的肝损伤。2.铜陵白姜对酒精性肝损伤小鼠具有保护作用。
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