番茄叶霉病菌拮抗内生放线菌的筛选及其活性物质的初步研究

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番茄叶霉病是番茄生产中普遍发生的病害,尤其在保护地内危害更为严重,给番茄生产带来了巨大的损失。植物内生放线菌是一种丰富的微生物资源,能产生有生物活性的次级代谢产物,在植物病害防治中有重要意义。本论文针对番茄叶霉病在蔬菜生产中的危害,从多种植物内生放线菌中筛选对番茄叶霉病有生防前景的拮抗菌株。通过皿内对峙试验,从175株内生放线菌中筛选出对番茄叶霉病菌有拮抗作用的菌株26株,对番茄灰霉病菌有拮抗作用的菌株14株,对番茄早疫病菌有拮抗作用的菌株26株。其中14株菌株对这三种病菌同时具有拮抗作用。菌株BAR1-5是测试菌株中拮抗作用最强的一株内生放线菌。盆栽试验中,使用26株番茄叶霉菌拮抗内生放线菌的发酵上清液和菌悬液对番茄叶霉病进行防治,菌株BAR1-5防治效果仍然最佳,达到49.7%,而接种前施药和接种后施药的生防效果分别达到62.6%和50.6%。田间小区试验中,该菌株发酵液原液和稀释5倍液的防效分别达到42.5%和33.1%,表现出较好的防治效果。菌株BAR1-5的确是一株很有生防潜力的内生放线菌。通过形态特征、培养特征、生理生化特征等方面的试验,结合16S rDNA序列分析,菌株BAR1-5鉴定为假诺卡氏菌,在系统发育树中与假诺卡氏菌亚目,假诺卡氏菌科,Goodfellowia属亲缘关系最近。对菌株BAR1-5的发酵培养基配方和发酵条件进行优化。单因子试验表明,菌株BAR1-5分别以1%葡萄糖为碳源、0.2%酵母膏为氮源、0.05%MgSO4为无机盐时,对番茄叶霉病菌的抑菌活性均最高。在此基础上,用正交试验设计方法优化培养基配方。优化后的培养基成分为2%黄豆粉、0.5%玉米粉、0.5%葡萄糖、1%酵母膏、0.08% MgSO4。发酵条件优化结果为28℃,120r/min,培养基初始pH为7.2~7.5,摇瓶装液量50mL/250mL,最佳发酵时间约为144h。对菌株BAR1-5产生的活性物质理化性质研究结果表明,该活性物质对紫外线照射稳定,在弱碱和中性pH下对高温较稳定。能全部溶于正丁醇,大部份溶于乙酸乙酯,不溶于苯、石油醚。通过pH纸层析,捷克八溶剂体系,纸电泳技术研究,可初步判断菌株BAR1-5产生的抗菌活性物质为两性化合物,离子特性为中性,属于非水溶性Ⅱ型抗生素。全波段紫外扫描和薄层层析试验结果均证明,菌株BAR1-5产生的活性物质主要包括三个活性组分。以上试验为这些化合物的分离和鉴定提供了依据。
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