本研究论文通过对重组大肠杆菌生产肿瘤血管生长抑制因子kringle5发酵工艺和纯化工艺的优化,进一步提高kringle5蛋白的表达量,寻找一种简单、快速、分离效果好的纯化工艺。本论文的研究工作将为kringle5蛋白的大规模生产和临床应用奠定基础。 本研究论文在构建融合型肿瘤血管生长抑制因子kringle5原核表达系统的基础上,通过改变培养基中氮源的种类和含量、无机盐的种类和含量以及碳氮比,确定了最合适的培养基为（g/L）:酵母提取物10,NH₄Cl 1.33,NaH₂PO₄ 2,Na₂HPO₄ 5,MgSO₄·7H₂O 1,葡萄糖6。采用优化后的培养基,通过正交实验,对重组菌的发酵工艺进行了优化,优化后的重组菌发酵条件为:温度35℃,pH7.0,接种量8%,摇床转速260r/min,诱导剂浓度0.8 mmol/L,诱导时机OD₆₀₀0.6,诱导时间6h。摇瓶发酵的七个因素中,溶液中诱导剂的浓度是最显著的影响因素,诱导时间、诱导时机、温度、pH、摇床转速的影响次之,而接种量的影响不显著。通过发酵罐中重组菌的分批培养,确定了培养液中的最佳溶氧量为40%。采用优化后的发酵工艺,在20L发酵罐中kringle 5蛋白的表达量可达0.59g/L。采用Cu²⁺螯合的Sepharose Fast Flow柱和CM Sepharose CL-6B阳离子柱两步层析对蛋白进行了纯化,kringle5蛋白的最终纯度为96%,得率为0.3%。通过鸡胚绒毛尿囊膜法证明kringle5蛋白对鸡胚绒毛尿囊膜血管增生有一定的抑制作用。