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目的：研究磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol3-kinase）特异性抑制剂LY294002对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株（A2780/Taxol）多药耐药逆转作用机制。第一部分紫杉醇耐药细胞的鉴定与培养方法：1. CCK-8法检测卵巢癌亲本细胞2780和耐药细胞A2780/Taxol的增殖能力。2.流式细胞仪检测卵巢癌亲本细胞2780和耐药细胞A2780/Taxol的周期分布。3. CCK-8法检测卵巢癌亲本细胞2780和耐药细胞A2780/Taxol对紫杉醇的敏感性。4.免疫细胞化学检测卵巢癌亲本细胞2780和耐药细胞A2780/Taxol的P-gp蛋白的表达。5. western blot检测卵巢癌亲本细胞2780和耐药细胞A2780/Taxol的P-gp蛋白的表达。结果：1. CCK-8检测细胞增殖结果：亲本细胞的增殖能力强于耐药细胞。2.流式细胞仪检测周期结果：与亲本细胞A2780相比较，紫杉醇耐药A2780/Taxol细胞，G1期增多，S期减少。3. CCK-8检测耐药指数结果：A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50为(36.81±2.05) μg/mL，亲本A2780细胞对紫杉醇的IC50为(1.397±0.18)μg/mL，耐药指数(RI)为26.35。4.免疫细胞化学检测P-gp结果：P-gp蛋白在A2780/Taxol细胞中表达为阳性，而在A2780细胞中表达呈阴性。5. Western blot检测P-gp结果：P-gp蛋白在A2780/Taxol细胞中高表达，而在A2780细胞弱表达或不表达。第二部分PI3K特异性抑制剂LY294002对卵巢癌紫杉醇耐药细胞逆转耐药作用的研究方法：1.流式细胞仪检测不同生理浓度的PI3K特异性抑制剂LY294002干预耐药细胞后，耐药细胞的凋亡情况。2. CCK-8法检测PI3K特异性抑制剂LY294002干预耐药细胞6、12、24小时后，计算LY294002对耐药细胞的抑制率。3. CCK-8法检测耐药细胞A2780/Taxol和经LY294002干预后耐药细胞A2780/Taxol对紫杉醇的敏感性。4.流式细胞仪检测耐药细胞A2780/Taxol和经LY294002干预后耐药细胞A2780/Taxol的周期和凋亡。5.运用western blot检测耐药细胞A2780/Taxol和经LY294002干预后耐药细胞A2780/Taxol细胞P-gp、p-Akt、Akt蛋白的表达。结果：1.流式细胞仪检测细胞凋亡结果：紫杉醇耐药细胞的凋亡率随着生理浓度的LY294002浓度的增加而增大，随着LY294002干预时间增加而增大。2. CCK-8检测抑制率结果：随着LY294002干预耐药细胞时间越长，对细胞抑制效果越明显。3. CCK-8检测耐药指数结果：与紫杉醇耐药细胞比较，经LY294002干预后的紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的敏感性增加，耐药指数为：3.96。4.流式细胞仪检测凋亡结果：与紫杉醇耐药细胞比较，经LY294002干预后的紫杉醇耐药细胞凋亡率增加。5.流式细胞仪检测周期结果：与紫杉醇耐药细胞比较，经LY294002干预后的紫杉醇耐药细胞S期明显缩短。6. Western blot检测P-gp、p-Akt和Akt结果显示：与紫杉醇耐药细胞比较，经LY294002干预后的紫杉醇耐药细胞P-gp和p-Akt蛋白有明显的减弱。结论：经LY294002干预后，紫杉醇耐药细胞能够明显增加对紫杉醇的敏感性。