小鼠皮肤切创愈合过程中Ⅱ型大麻素受体(CB2R)表达的研究

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目的皮肤损伤愈合是一个复杂而连续的过程,其大致可以分为三个阶段:炎症期、增殖期和重建修复期,其各阶段是相互联系,相互影响的,有大量细胞、细胞因子和炎症介质的参与其间。Ⅱ型大麻素受体(cannabinoid receptor type 2, CB2R)为G蛋白偶联受体,能激活多种信号转导通路,主要分布于外周,如免疫系统和造血细胞。新近研究发现CB2R与多种不同疾病和组织损伤有关,发挥重要的抗炎和抗纤维化的作用。本研究应用免疫组织化学染色和Western blot技术,检测小鼠皮肤损伤区在损伤后不同时间CB2R表达的变化情况,探讨CB2R在皮肤损伤愈合中的作用及其在损伤时间推断上应用的可能性。实验材料与方法健康成年清洁级昆明系小鼠50只,体质量35g-40g,随机分为10组,每组5只,其中1组为正常对照组。乙醚气体吸入麻醉,背部剪毛处理后,常规手术消毒,在背部中央做一纵行长1.5cm皮肤全层切口,深达筋膜,分别于伤后0h,6h,12h,1d,3d,5d,7d,10d和14d将小鼠脱颈椎处死,取伤口处1.5cm×1.0cm皮肤组织,对照组小鼠取相同部位同等大小皮肤,以备HE染色、免疫组织化学染色和Western blot蛋白印迹技术应用。应用免疫组织化学和Western blot方法检测50例小鼠皮肤切创后不同时间CB2R变化情况,以非切创小鼠皮肤组织作对照,显微镜x400倍下,在损伤区及损伤周边区随机选取10个视野,计数细胞总数、阳性细胞数及阳性细胞率。应用Fluochem V2.0软件测各片段的平均光密度值,测得数据用均数±标准差(x±s)表示。用SPSS13.0 for Windows进行单因素方差分析,以P<0.05为差异有显著性意义。免疫组织化学结果显示,对照组CB2R表达于表皮、毛囊、皮脂腺、皮肌层、血管平滑肌、神经纤维外膜及神经纤维束束膜;伤后6h切创皮肤损伤区及周边区多核粒细胞少量表达CB2R,12h-24h以单个核细胞阳性表达为主,3d以单个核细胞和梭形成纤维细胞表达为主,5d-14d以梭形成纤维细胞为主。CB2R阳性细胞率于0h-3d逐渐升高,5d达最高峰,随后逐渐下降。经Western blotting检测显示,对照及各个损伤时间段都有CB2R阳性条带,其中5d为CB2R表达高峰。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,CB2R于损伤区及周边区多核粒细胞、单个核细胞、成纤维细胞中表达,并具有规律性,提示CB2R可能参与皮肤损伤愈合,并可用于皮肤损伤时间的推断。
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