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孕激素作为甾体激素的一种,对雌性脊椎动物繁殖有十分重要的作用,其功能的发挥有赖于孕激素受体(Progesterone Receptor,PR)的介导。本研究通过克隆测序分析,定量PCR,Western Blot,以及免疫组织化学技术,对扬子鳄的孕激素受体基因进行了分析,探讨了孕激素受体在不同时期扬子鳄不同组织中的表达方式,以期为了解孕激素受体在爬行动物卵巢发育过程中的调控机制提供更多的基础资料。 本研究获得了扬子鳄 PR部分 cDNA(1655bp),该序列包含终止密码子TGA以及3’poly A尾巴,其中编码区1190bp,编码395个氨基酸。扬子鳄的孕酮受体有典型的核受体基因结构,包含5个功能结构域,推测的氨基酸序列同其它脊椎动物比对结果显示,PR的DNA结合域(DNA binding domain, DBD)以及配体结合域(ligandbinding domain, LDB)同源性较高。由孕激素受体氨基酸序列构建的系统发生树显示鳄类与鸟类先聚为一枝,最后再同龟鳖目、有鳞目等其它爬行类聚集。这同其它基于分子生物学证据获得的爬行类鸟类之间的进化关系基本一致,为鳄类在脊椎动物中的进化地位提供了新的分子学证据。荧光定量PCR与Western Blot的研究结果一致,显示 PR在所研究的扬子鳄各个组织中的都有不同程度的表达,说明 PR在扬子鳄体内分布广泛。与此同时,孕激素受体在不同组织中表达亦存在差异,其中卵巢的PR mRNA表达水平同其它组织比对结果差异极显著(p<0.05),其次是肝脏、肾脏和肺,其余器官则表达量偏低且无明显差异(p>0.05)。通过比较冬眠期与活跃期扬子鳄 PR mRNA表达量发现,冬眠期的扬子鳄肾脏与胃 PR含量要高于非冬眠期(p<0.05),推测这可能与冬眠期扬子鳄的生理特性相关。研究同时对不同生殖阶段 PR mRNA在扬子鳄卵巢中的表达进行了检测,结果表明孕激素受体在卵巢中的表达变化很大,且与扬子鳄卵巢卵泡发育的情况有十分密切的关系,其中卵黄卵泡发育较成熟的个体卵巢孕激素受体表达较低。推测孕激素与鳄类卵黄成熟关系密切。