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目的:本实验采用Fas、FasL免疫组织化学染色和TUNEL法细胞原位凋亡染色双重标记,主要探讨结肠粘膜上皮细胞恶性转化过程中,不同时相Fas、FasL的表达情况;Fas、FasL的表达与结肠腺癌细胞和局部肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)凋亡之间的关系以及与结肠腺癌生物学行为之间的关系。方法:收集结肠手术切除标本和相应的临床资料,分为四组:正常结肠粘膜上皮9例;结肠良性增生性息肉20例;结肠腺瘤(包括I、II、III级不典型增生)44例;结肠腺癌50例。应用免疫组织化学法检测结肠粘膜上皮细胞和TIL中的Fas和FasL表达,不复染细胞核,不封片,再用TUNEL法检测凋亡的结肠粘膜上皮细胞和TIL,分别用辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶两种酶系统显色,实现在同一结肠组织切片上同时从蛋白水平和DNA水平观察相关抗原的表达情况和凋亡细胞的形态特点,并结合计算机图像分析处理系统,定量癌细胞和TIL的凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:①Fas在不同结肠组织中的表达规律是:结肠腺癌中表达最低,结肠腺瘤、增生性息肉逐渐增高,表达水平最高的是正常结肠粘膜上皮。FasL在不同结肠组织中的表达规律与Fas正好相反,结肠腺癌中表达最高,结肠腺瘤、增生性息肉逐渐降低,正常结肠粘膜上皮中几乎不表达FasL。②不同年龄组之间(tFasPI=1.09,tFasLPI=0.83)、男女之间(tFasPI=1.12,tFasLPI=0.75)Fas、FasL的表达均无显著性差异(p>0.05),各分化程度之间(FFasPI=4.42,FFasLPI=5.85)、不同的Duke’s分期之间(FFasPI=10.43,FFasLPI=3.52)、有无淋巴结转移之间(tFasPI=2.31,tFasLPI=5.63)Fas、FasL表达均有显著性差异(p<0.05)。Fas(FasL)的表达与结肠腺癌不同分化程度、不同Duke’s分期、淋巴结转移癌呈负(正)相关。③同一结肠腺癌组织切片或不同结肠腺癌组织切片中,Fas、FasL表达不均匀,癌细胞和TIL的AI也不同,Fas阳(阴)性区的癌细胞、TIL的AI均比Fas阴(阳)性区的癌细胞、TIL的AI高(低),FasL阳(阴)性区癌细胞、TIL的AI比FasL阴(阳)性区癌细胞、TIL的AI高(低)(p<0.05);Fas阳性区癌细胞(TIL)的AI比FasL阳性区癌细胞(TIL)的AI高(低)(p<0.05);Fas阳(阴)性区癌细胞的AI高(低)于TIL的AI,FasL阳(阴)性区癌细胞的AI低(高)于TIL的AI(p<0.05)。结论:①从正常结肠粘膜上皮细胞向结肠腺癌转化的过程中,结肠粘膜上皮细胞中Fas的表达量逐渐减少,FasL表达量逐渐增多,结肠腺癌细胞的AI逐渐下降,TIL的AI逐渐增高,结肠腺癌细胞通过Fas-FasL系统的作用,清除癌旁TIL,提示Fas-FasL系统在结肠腺癌的免疫逃避(immune escape)及免疫反击(immune counterattack)中起重要作用。②Fas、FasL的表达与结肠腺癌的临床病理学特征密切相关,可能作为结肠腺癌早期诊断和评估预后的重要参考指标之一。