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目的胶质瘤是神经外科最常见的颅内恶性肿瘤之一,手术难以完整切除,对化疗和放疗不甚敏感,容易复发,临床治疗效果差,普通CT、MR等影像学手段难以对其作出早期的正确的诊断,而且难进行活体动物试验的研究。人转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)是一种主要位于细胞膜上的跨膜糖蛋白,通过与转铁蛋白的相互作用来介导铁的吸收,与细胞的生长、增殖和分化以及细胞恶变密切相关,同时也是MR分子成像比较理想的报告基因。本研究通过观察TfR在不同级别胶质瘤组织和正常脑组织中的表达情况,分析其表达与病理及病理分级之间的关系;并进一步探讨运用TfR作为报告基因,制作包含TfR编码区的表达质粒,进行检测鉴定,为其在体内、体外进行MR分子影像学研究提供可能。方法收集中南大学湘雅医院神经外科2005年12月至2006年10月手术切除的不同级别的胶质瘤组织标本38例,以6例脑外伤组织作为对照,运用免疫组织化学染色方法观察TfR在胶质瘤以及正常脑组织中的表达情况,分析胶质瘤组织TfR的表达水平与病理分级之间以及与正常脑组织之间的关系。另外,培养人脑胶质瘤U251细胞,进行细胞总RNA抽提,运用RT-PCR方法进行TfR基因的完整编码区外显子的扩增,经过酶切、连接后构建pCDNA3.1(+)-TfR的表达质粒,鉴定正确后按脂质体转染方法转染人胶质瘤U251细胞,使其过量表达,通过pEGFPN1-TfR检测其瞬时转染的效率;用G418对稳定表达pCDNA3.1(+)-TfR的细胞进行筛选,挑选阳性细胞克隆,运用Western blot、流式细胞检测技术和细胞免疫化学以及mRNA半定量的方法检测TfR在转染前后的表达水平,鉴定转染的效果。结果病理组织切片的免疫组织化学结果显示不同级别胶质瘤和正常脑组织中均有的TfR阳性表达,胶质瘤细胞表达阳性率为100%,正常脑组织中神经元细胞、血管内皮细胞可见TfR阳性表达,未见明显的胶质细胞表达。TfR在胶质瘤组织中的表达水平较正常脑组织增高(P<0.01);胶质瘤TfR表达与病理学分级之间有明显的正相关性,高级别胶质瘤的TfR表达明显高于低级别胶质瘤(P<0.01),但高级别、低级别胶质瘤内TfR表达无明显的差异性(P>0.05)。我们对培养的U251胶质瘤细胞进行总RNA的抽提,运用RT-PCR的方法进行TfR基因的扩增,成功构建了pCDNA3.1(+)-TfR表达质粒,测序鉴定正确;通过脂质体转染胶质瘤U251细胞,转染效率约25%,瞬时与稳定表达pCDNA3.1(+)-TfR编码的TfR蛋白明显增高(P<0.01);同时通过G418成功筛选出稳定表达TfR的阳性细胞克隆。结论胶质瘤组织中TfR蛋白的表达水平高于正常脑组织;高级别胶质瘤的TfR蛋白表达明显高于低级别胶质瘤TfR的高表达参与了胶质瘤的生长、增殖与分化。成功构建了pCDNA3.1(+)-TfR表达质粒;质粒转染U251细胞后瞬时与稳定表达的TfR蛋白明显增高;成功筛选出pCDNA3.1(+)-TfR阳性细胞克隆,为分子影像学的实验研究奠定了坚实的基础。