前言：　　胎盘是胚胎发育成熟，妊娠顺利完成的重要因素。而胎盘中滋养细胞是母体与胎儿直接接触的部分，分为细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和绒毛膜外滋养层细胞。晚期囊胚着床后，绒毛膜外滋养细胞向子宫蜕膜层和肌层血管的进一步侵袭、迁移和分化是胎盘形成和母胎循环建立的关键，而且，绒毛膜外滋养层细胞适度的侵袭、迁移是正常妊娠所必须的。绒毛膜外滋养层细胞生物学功能过强会导致胎盘植入、葡萄胎及绒癌等疾病;功能过弱会导致子宫螺旋动脉重铸不足，出现流产、胎儿生长受限及子痫前期等病理产科。明确绒毛膜外滋养层细胞的侵袭和迁徙等的调节机制，是解决上述疾病的突破口和希望所在。　　2007年Ferretti C等提出绒毛膜外滋养层细胞与肿瘤细胞在生物学性能方面存在着惊人的相似，包括高度的增殖能力，缺乏细胞间的接触抑制，迁移入侵能力，可以逃脱免疫系统的能力等等。因此胎盘滋养细胞被定义为一种假恶性细胞，它的迁移和侵袭行为又被称为“生理性转移”。近年来，越来越多的肿瘤侵袭诱导或抑制基因应用于滋养细胞的研究，例如nm-23、Kiss-1和RKIP等这些肿瘤转移抑制基因在对滋养细胞的生物学行为有影响。　　Tiam1(T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1)，全称为T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1，最初是由荷兰癌症研究所Habets等发现并命名的。他们把隔离于逆转录病毒的侵袭性病毒变异株作为侵袭相关前病毒插入簇分析时发现一个单拷贝的不同于侵袭性细胞克隆BWMLV-3.6的DNA片段，经与基因库对比及DNA印迹(Southen blot)分析，证实这是一个可影响侵袭力的基因，命名为Tiam 1基因。Tiam1属于Rho三磷酸鸟嘌呤核苷酸水解酶(GTPases)家族。Tiam1则作为Rho蛋白家族重要成员Rac1的特异性鸟苷酸转换因子(guanine nucleotide exchange factor，GEF)促进GDP的释放以及与GTP的结合，它的GEF转换功能与其蛋白的细胞膜转位、氨基酸残基磷酸化有关。大量研究表明Tiam1基因在不同组织来源的肿瘤细胞中高表达，例如乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肝癌、直肠癌、甲状腺癌、前列腺癌、膀胱癌和胰腺癌等。而在正常上皮组织中，Tiam1通过上调E-cadherin蛋白表达对上皮细胞的迁移具有抑制作用，在肾癌肿瘤细胞中通过调节TIMP1、TIMP9的表达抑制肿瘤细胞的迁移。　　关于Tiam1是否在滋养细胞中有表达，是否对滋养细胞的侵袭、迁移具有调节作用至今还未见任何报道。本研究将通过检测不同侵袭、迁移能力的（早孕期和孕晚期）胎盘组织中Tiam1的表达量及表达部位;并检测其对绒毛膜外滋养层细胞系HTR-8/svneo细胞迁移能力的变化，探讨Tiam1与胎盘滋养细胞生物学功能改变的调节机制。　　方法：　　第一部分:应用实时定量RT-PCR法，免疫组织化学和Western blot进行Tiam1的定位及定量研究，明确Tiam1在以下两种不同分组中的表达量是否有差异:　　以妊娠周数作为分组条件，留取妊娠7～9周的正常妊娠人工流产和妊娠38-40周的正常足月剖宫产胎盘绒毛组织。应用免疫组织化学法，观察Tiam1在早孕胎盘绒毛及足月胎盘绒毛中的表达部位。应用RT-PCR和Western blotd分别比较Tiam1在mRNA和蛋白水平，在早孕组和足月组胎盘中的表达含量是否有差异。　　第二部分:体外培养HTR-8/SVneo滋养细胞，脂质体2000介导瞬时转染Tiam1高表达质粒和沉默Tiam1基因的siRNA进入绒毛膜外滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系。Transwell法观察不同分组的HTR-8/SVneo细胞迁移能力的变化。　　第三部分:检测Tiam1高表达质粒和沉默Tiam1基因的siRNA转染的HTR-8/SVneo细胞中β-catenin蛋白、E-cadherin及N-cadherin蛋白的表达差异，应用RT-PCR检测不同组别的N-cadherin的mRNA表达量差异，探讨Tiam1基因影响HTR-8/SVneo细胞迁移能力的作用机制。　　结果：　　第一部分:我们利用quantitative real-time RT-PCR方法检测Tiam1 mRNA在具有不同迁移及侵袭能力的胎盘中的表达量。发现Tiam1在mRNA水平上，在倾向于侵袭、迁移能力弱的足月组中表达量增高，而在倾向于侵袭、迁移能力强的早孕组中表达降低;足月组中Tiam1的mRNA水平的表达量是早孕组中的8倍。免疫组化发现，Tiam1蛋白在足月组胎盘中表达强于早孕组绒毛，差异有统计学意义。进一步的Western blot结果提示，足月组胎盘中的Tiam1蛋白表达显著高于早孕组绒毛的蛋白表达量，差异有统计学意义。这一结果提示Tiam1可能与胎盘滋养细胞的生物学行为有密切相关。　　第二部分:瞬时转染高表达的Tiam1质粒和沉默Tiam1的干扰RNA进入HTR-8/SVneo细胞系，HTR-8/SVneo细胞的转染效率均达到了70-80％，最佳转染时间为48小时。转染入高表达的Tiam1质粒的HTR-8/SVneo细胞中Tiam1蛋白的表达明显上调，与对照组相比差异有统计学意义;转染入沉默Tiam1的干扰RNA的HTR-8/SVneo细胞中Tiam1蛋白的表达水平明显下调，与对照组相比差异有统计学意义（图2-4）。Westernblot结果表明瞬时转染高表达的Tiam1质粒的HTR-8/SVneo细胞中Tiam1的蛋白表达明显增加了，而瞬时转染沉默Tiam1基因的siRNA的HTR-8/SVneo细胞中Tiam1的蛋白表达则明显下调。分别记录在转染高表达Tiam1质粒和沉默Tiam1的siRNA后24小时、48小时和72小时，计数穿过Transwell小室的细胞数，转染沉默Tiam1基因的siRNA后48小时的（si组）HTR-8/SVneo细胞迁移能力增强，而转染高表达Tiam1质粒的（H组）HTR-8/SVneo细胞迁移能力降低，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01)。提示Tiam1可以抑制HTR-8/SVneo细胞的迁移。　　第三部分:瞬时转染高表达的Tiam1质粒和沉默Tiam1的干扰RNA的HTR-8/SVneo细胞，48小时后测定细胞中β-catenin蛋白、E-cadherin及N-cadherin蛋白的表达，发现N-cadherin蛋白在Tiam1高表达组的HTR-8/SVneo细胞中的表达量是降低的，而siRNA组中的表达是明显增加的，与对照组相比均有统计学意义。而β-catenin蛋白在各组中的表达无明显差异。E-cadherin蛋白在HTR-8/SVneo细胞中未见表达。　　结论：　　Tiam1在早孕绒毛和足月胎盘中均有表达，在足月胎盘中表达增高，与早孕组相比差异有统计学意义。Tiam1可能通过下调N-cadherin的蛋白表达抑制绒毛膜外滋养细胞系HTR-8/SVneo的迁移，Tiam1对HTR-8/Svneo细胞迁移的影响不通过调节β-catenin和E-cadherin蛋白的表达。