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B7-H4(别称B7S1或B7x),是2003年发现的B7家族新分子。人的B7-H4基因含有5个内含子和6个外显子,编码区基因长度为849个bp,位于人染色体的1p11.1。作为一种重要的负性刺激因子,当B7-H4分子与相应受体结合后,会抑制ERK和JNK蛋白激酶活性,抑制IL-2基因转录,阻断了PI3K/AKT途径,从而影响了细胞周期和细胞凋亡,抑制一些细胞因子的分泌和T细胞的增殖。越来越多的文献报道,B7-H4分子高表达于多种肿瘤中,如肺癌、肾癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌和食管癌等。另外,在一些肿瘤浸润性巨噬细胞及肿瘤的血管内皮细胞也检测到B7-H4的高量表达,这些研究显示B7-H4作为一种新的肿瘤标志物为研究其在机体肿瘤免疫逃逸中的机制和癌症的治疗提供了帮助。本课题组在来源于人扁桃体的部分淋巴细胞中检测到B7-H4受体的表达,并以此为基础研制鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体,并运用本课题组建立的非小细胞肺癌细胞株SPCA-1与Jurkat细胞共培养的体系初步研究了单克隆抗体的生物学功能。鼠抗人B7-H4受体单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究【目的】研制鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体并初步研究其生物学功能【方法】从人体扁桃体组织中获取淋巴细胞,并以此为免疫原,免疫5~8周龄的BALB/c小鼠,融合当天取小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞Ag8融合。一段时间后,运用流式细胞技术(FCM)对杂交瘤上清进行初步筛选,以B7-H4-m Fc-FITC为基础,通过位点竞争抑制试验进一步筛选,再通过多次亚克隆技术获得能稳定分泌抗B7-H4受体单克隆抗体的细胞株。通过快速试纸法测定目标单抗的Ig亚型,对纯化后的单抗标记生物素后借助Western Blot实验和ELISA实验对单克隆抗体进行鉴定。结合本课题组建立的SPCA-1细胞与Jurkat细胞共培养的体系初步研究单克隆抗体的功能。【结果】获得了一株能稳定分泌鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体,命名为7B11。经快速试纸法鉴定7B11为Ig G1类,Western Blot结果显示7B11不能与人B7-H4受体蛋白特异性结合,但ELISA实验结果表明7B11能特异性识别B7-H4受体蛋白。将7B11加入到SPCA-1细胞与Jurkat细胞共培养的体系作用72小时后,能阻断SPCA-1细胞表达的B7-H4分子对Jurkat细胞的作用,使Jurkat细胞上CD3、CD69的表达水平及细胞增殖水平趋近正常。【结论】成功研制了一株鼠抗人B7-H4受体的单克隆抗体,该单克隆抗体在共培养体系中能与B7-H4受体结合阻断了B7-H4分子的负性调控作用,为进一步研究B7-H4及其受体等肿瘤标志物在肿瘤免疫应答中的作用提供了帮助。