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目的三阴性乳腺癌是一类乳腺癌亚型,以雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER-2)均不表达为特征,侵袭性极强,预后极差。Hedgehog、Notch信号通路在乳腺癌中表达均增加,和三阴性乳腺癌的产生、转移及预测结局等方面关系密切,Cyclopamine(环靶明)可以降低Hedgehog信号通路的活性,显著的减弱乳腺癌细胞增殖水平。有研究表明Hedgehog和Notch信号通路之间存在着交互对话,既然两者存在交互对话,那么抑制三阴性乳腺癌Hedgehog信号通路有可能会影响到Notch信号通路的活性。为此,本文应用环靶明影响MDA-MB-231细胞Hedgehog信号通路,探讨Hedgehog信号通路的Smo、Gli-1表达水平,及其是否对Notch信号通路的关键分子Notch-1、Hes-1的表达产生影响。方法培养购自中国科学院细胞库的MDA-MB-231细胞,按照加药浓度将实验分为4组:Cy0组(环靶明浓度为0μmol/L组),Cy10组(环靶明浓度为10μmol/L)、Cy20组(环靶明浓度为20μmol/L组)、Cy40组(环靶明浓度为40μmol/L组),环靶明处理48h后提取mRNA及蛋白,RT-PCR检测细胞中Smo、Gli-1、Notch-1及Hes-1 mRNA的表达水平,Smo、Gli-1、Notch-1及Hes-1蛋白的表达情况通过Western blot进行检测,最后进行统计学分析。结果(1)Cyclopamine分别以0、10、20、40 μmol/L浓度作用于细胞48h,通过Western blot检测Smo蛋白的表达,实时定量PCR法检测mRNA的表达情况,结果发现,不同浓度环靶明处理MDA-MB-231细胞后,Smo蛋白的表达下降,药物浓度越高,蛋白表达下降幅度越大(P<0.01),不同浓度环靶明处理MDA-MB-231细胞后,Smo mRNA的表达均下降,药物浓度越高,mRNA表达下降幅度越大(P<0.01);同样,不同浓度环靶明处理MDA-MB-231细胞后,Gli-1蛋白的表达下降,药物浓度越高,蛋白表达下降幅度越大(P<0.01),不同浓度环靶明处理MDA-MB-231细胞后,Gli-1 mRNA的表达均下降,药物浓度越高,mRNA表达下降幅度越大(P<0.01)。(2)Cyclopamine分别以0、10、20、40 μmol/L浓度作用于细胞48h,通过Western blot和实时定量PCR法分别检测mRNA的表达,结果发现:不同浓度环靶明处理MDA-MB-231细胞后,Notch-1蛋白的表达无明显变化,与药物浓度高低也无关系(P>0.05),不同浓度环靶明处理MDA-MB-231细胞后,Notch-1 mRNA的表达无明显变化,与药物浓度高低也无关系(P>0.05);同样,不同浓度环靶明处理MDA-MB-231细胞后,Hes-1蛋白的表达无明显变化,与药物浓度高低也无关系(P>0.05);不同浓度环靶明处理MDA-MB-231细胞后,Hes-1 mRNA的表达无明显变化,与药物浓度高低也无关系(P>0.05)。结论(1)Cyclopamine特异性抑制Hedgehog信号通路,通过体外实验处理MDA-MB-231细胞,不同浓度的Cyclopamine均可抑制Hedgehog信号通路关键分子Smo及Gli-1的表达,且随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强。(2)Cyclopamine体外作用于MDA-MB-231细胞,不影响Notch信号通路中的Notch-1及Hes-1关键分子的表达。(3)抑制TNBC中Hedgehog信号通路并不影响Notch信号通路的活性。