多肽固相合成技术是现代蛋白质化学研究的关键技术,也是目前多肽合成的常规技术。本论文主要研究了多肽固相合成技术中的组合化学合成法与微波辅助合成法,分别以胸腺五肽和伐普肽作为模型肽。 胸腺五肽具有双向免疫调节作用,可增强机体免疫的能力,有很高的临床应用价值,在人体血浆中很快被蛋白酶和氨肽酶降解,半衰期仅30秒。将D型氨基酸引入肽链是一种有效提高肽类化合物稳定性的方法,为提高胸腺五肽的稳定性,本文应用茶袋法合成胸腺五肽D-氨基酸取代类似物肽库,并进行药理活性研究,寻找免疫活性增强、稳定性升高的肽链。 研究发现采用茶袋法合成D型氨基酸取代的胸腺五肽类似物肽库,可在短时间内完成32条肽链的合成,方法简单、操作方便,节省了试剂用量,降低了成本,大大提高了合成效率。粗肽得率平均在54%左右,精制后,纯肽得率平均在36%左右,对T淋巴细胞增殖反应的影响作用表明,有两个类似物具有明显刺激T淋巴细胞增殖的活性作用,与胸腺五肽相比,刺激作用更显著。 伐普肽是一种具有分子内二硫键的环八肽生长抑素类似物,与生长抑素相比,伐普肽具有更高的代谢稳定性,生物半衰期大大延长,具有良好的市场前景。微波辐射可以使反应速率大幅度提高、反应时间缩短、产率提高,将微波应用于有机化学反应中,可以大幅度提高产物得率。 本文在固相合成接肽偶合反应中运用微波强化技术,针对微波反应时间、温度、比例等条件,采用正交实验多元非线性回归,通过响应面优化法进行条件优化,利用该优化条件合成伐普肽。同时考察影响伐普肽最终得率的脱保护、洗涤和切割过程以及二硫键的形成过程。 研究发现氨基酸的活化采用DCC—HOBt复合剂法,氨基酸用量为树脂担载量的3倍,活化时间选取2～3h为宜。缩合过程中缬氨酸缩合采用600w微波功率,2min升温时间,4min维持时间,60℃微波温度:其余氨基酸采用300w微波功率,45s升温时间,4min维持时间,60℃微波温度。微波强化偶合反应时间在6min以内,与常规反应相比,提高合成速率12-36倍,保护氨基酸与树脂的偶合效率明显提高,达到90%以上。树脂的洗涤采用NMP、MeOH、DCM交替