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草坪以其重要的坪用特性及环境生态调节功能,其面积、质量从一定程度上反映了一个城市的环境质量和文明程度。
狗牙根白化病是发生在狗牙根上的一种重要病害,在全世界均有分布。本试验,结合传统植物病理学技术与现代分子生物学技术,对中国大陆狗牙根白化病进行研究,试验结果表明,发生在中国大陆的狗牙根白化病病株体内含有植原体,健康植株对照没有。
对狗牙根白化病发病组织进行培养,对培养物分离纯化,接种到健康狗牙根并进行隔离培养观察,试验结果未有狗牙根白化病发生,直接排除了此培养物为狗牙根白化病病原;对狗牙根白化病发病组织进行13000倍透射电镜观察,其细胞内有典型植原体类物质,对照没有。
试验采用Nakad等(1994)的方法,并对其进行稍加改进。提取得到狗牙根白化病发病植株DNA,引物为植原体16S rDNA通用引物,PCR扩增,设狗牙根健康植株DNA对照。从狗牙根白化病发病植株供试叶片组织中均扩增到1.3 kb大小的特异片段,健康植株未得到。将PCR产物送生物公司测序,测序结果提交Genebank,获得序列号分别为:EU377477和EU409293。对其进行比对分析,序列与Carmine M等(2004)报道的Candidatus Phytoplasma cynodontis16S rDNA序列有99%的相似性,差异性<2.5%,所以应归属于狗牙根植原体组BGWL(16S rXIV-A)。
序列来源验证试验采用Roche公司生产的地高辛高效标记检测试剂盒,对特异片段进行了Southern杂交分析,试验结果证实了特异片段来自狗牙根白化病发病植株,而非随机扩增产物。
本研究还就狗牙根白化病对两种生防菌的敏感性进行了探讨性研究,设置四环素和蒸馏水对照。结果显示,在喷施了两种菌的发酵液后,发病率、病情指数、叶绿素含量、SOD、POD活性均有变化。其中对发病率和病情指数的影响,100%2菌明显优于30%C菌;对叶绿素含量的影响以100%C菌发酵液效果最好,50%Z菌发酵液和四环素效果相当;对SOD、POD活性变化的影响差异不明显。