目的：　　1.研究NOX4是否调控NSCLC有氧糖酵解。　　2.研究NOX4介导的NSCLC有氧糖酵解是否促进其恶性增殖。　　3.探究NOX4调控NSCLC有氧糖酵解的机制。　　方法：　　1.蛋白免疫印记（western blotting）。在A549和H460细胞株中，用siRNA瞬时干扰NOX4和pCMV-NOX4稳定过表达NOX4或（和）外加PEG-catelase处理后，用蛋白免疫印记检测M2型丙酮酸激酶（PKM2），葡萄糖转运体1（GLUT1），乳酸脱氢酶A（LDHA）和c-Myc的蛋白表达。另外，在过表达NOX4的A549细胞里加入DPI或LY294002后，观察c-Myc的表达变化。　　2.实时定量基因扩增荧光检测系统（RT-qPCR）。在A549和H460细胞株中，用siRNA瞬时干扰NOX4和pCMV-NOX4稳定过表达NOX4后，用qRT-PCR检测糖酵解相关酶和c-Myc的mRNA表达情况。另外，在A549细胞里加入DPI或LY294002后，观察c-Myc的mRNA水平表达变化。　　3. MTT。检测A549和H460经抑制NOX4后，2-DG对A549和H460细胞的毒性。　　4.细胞集落形成实验。细胞集落形成实验检测细胞经GKT137831处理后的A549和H460细胞的长期增殖能力。　　5.成瘤实验。将A549细胞悬液无菌皮下注射注入裸鼠体内，腹腔注射GKT137831或（和）2-DG，每隔一天观察并测量瘤体大小，记录瘤体的变化和裸鼠的生存时间。　　6.免疫组织化学法。将A549细胞悬液无菌皮下注射注入裸鼠体内，腹腔注射GKT137831后，36天后将裸鼠脱颈椎处死，取出肿瘤,采用免疫组织化学技术检测 PKM2，LDHA和GLUT1蛋白表达情况。　　7.乳酸试剂盒、ATP检测试剂盒和葡萄糖试剂盒。在A549和H460细胞株中，用siRNA瞬时干扰NOX4和pCMV-NOX4稳定过表达 NOX4后，用乳酸试剂盒、ATP检测试剂盒和葡萄糖试剂盒分别检测葡萄糖、乳酸和ATP浓度的变化。　　8. Amplex Red过氧化氢试剂盒。在稳定过表达NOX4的A549细胞中，外加PEG-catalase后检测细胞的过氧化氢（H2O2）的水平。　　结果：　　1.在抑制NOX4的A549和H460细胞中，细胞的乳酸生成，ATP生成和葡萄糖消耗显著减少在，且PKM2，LDHA和GlUT1在蛋白水平和mRNA表达水平也显著减少。在过表达NOX4的A549和H460细胞中，细胞的乳酸生成，ATP生成和葡糖糖消耗显著增多，且PKM2，LDHA和GLUT1在蛋白水平和mRNA表达水平也显著升高。在A549细胞诱导的裸鼠荷瘤模型中，免疫组化分析出腹腔注射GKT137831组的肿瘤PKM2，LDHA和GLUT1的蛋白表达显著下降。　　2.在 H460和 A549细胞水平，GKT13831能显著抑制其克隆形成能力。在H460和A549水平，抑制NOX4能显著增强2-DG对细胞的毒性。在A549细胞诱导的裸鼠荷瘤模型中，2-DG能显著加强GKT137831对肿瘤体积和重量的抑制能力且2-DG和 GKT137831联用能显著延长小鼠的生存的时间相比于单用GKT137831。　　3.在A549细胞中，干扰NOX4的表达能显著抑制c-Myc蛋白的表达，但对mRNA的表达水平没有影响。另外，使用c-Myc的干扰类似与NOX4的干扰能抑制ATP的生成，乳酸的生成和葡萄糖的消耗。然而，当NOX4和c-Myc同时被干扰后，由 NOX4干扰引起的细胞糖酵解抑制效应并没有发生额外的变化。A549细胞经LY294002处理24 h或DPI处理8 h后，c-Myc的蛋白表达显著下降，但mRNA水平没有显著性差异。另外，NOX4过表达能显著升高c-Myc的表达，但当NOX4过表达的A549细胞经过LY294002或DPI处理后，NOX4诱导 c-Myc高表达的现象被抑制。在过表达 NOX4的A549细胞中，当使用PEG-catalase处理细胞后，由NOX4引起的H2O2分泌增多和糖酵解表型被抑制。　　结论：　　1. NOX4促进NSCLC有氧糖酵解。　　2. NOX4通过促进NSCLC有氧糖酵解从而促进其恶性增殖。　　3. NOX4通过激活ROS/PI3K/AKT/c-Myc通路促进NSCLC有氧糖酵解。