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目的:熊果酸(Ursolic acid,UA)是从天然药用植物中提取的五环三萜类化合物,近年来研究表明其具有显著的抗肿瘤活性,但具体机制仍不明确;有关于UA抗人食管的报道较少。本实验拟研究UA对体外培养的人食管癌细胞Eca-109的诱导凋亡、抑制增殖作用及其可能的机制,并建立人食管癌裸鼠移植瘤动物模型,进一步探讨UA在体内对Eca-109细胞的生长抑制作用与机制。方法:1. UA体外作用于Eca-109细胞的实验研究:①MTT法检测不同浓度UA(0、10、20、30、40、50μmol/L)作用于Eca-109细胞24、48、72h后的增殖抑制作用,并分别计算IC50。②透射电镜观察经0、18.32 (1/2 IC50)、36.65μmol/L(IC50)UA作用48h后细胞超微结构的改变。③Hoechst 33258荧光染色观察不同浓度UA(0～50μmol/L)作用48h后Eca-109细胞的凋亡形态变化。④流式细胞术分析经0～50μmol/L UA处理48h后细胞周期分布与凋亡率。⑤Western blot分析不同浓度UA(0～50μmol/L)作用48h后对Eca-109细胞P27kip1、Bax、Bcl-2等蛋白表达的影响。2. UA作用于人食管癌裸鼠移植瘤的实验研究:①建立12只人食管癌Eca-109细胞裸鼠移植瘤动物模型,成瘤后随机分为四组,每组三只。分别给予0.2ml生理盐水、25、50、100mg/Kg/d UA腹腔隔天注射治疗,治疗14天后处死裸鼠,称瘤重、计算抑瘤率。②HE染色观察各组肿瘤组织与裸鼠重要器官(肝、肾、心、肺、脾等。)组织形态学变化。③透射电镜观察各组肿瘤组织超微结构的改变。④TUNEL法检测各浓度UA对肿瘤组织凋亡指数的影响。⑤免疫组化染色分析各组肿瘤组织COX-2、Bax、Bcl-2等蛋白表达的变化。结果:1.体外实验研究结果:①20～50μmol/L UA对Eca-109细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.01),并具明显的量效、时效依赖性,作用24、48、72h后的IC50分别为41.57 , 36.65 , 32.81μmol/L。②18.32～36.65μmol/L UA处理48h后的Eca-109细胞在电镜下见典型的凋亡小体形成。③UA作用后Hoechst 33258染色见Eca-109细胞核固缩变小、荧光亮度增强。④流式细胞分析结果显示UA将Eca-109细胞阻滞在G0/G1期,增殖指数随着UA上升而下降,而凋亡率随之增加。⑤Western blot结果提示UA下调Eca-109细胞Bcl-2表达,上调Bax、P27kip1表达。2.体内实验研究结果:①UA能抑制移植瘤生长,经25、50、100mg/Kg/d UA作用后的抑瘤率分别为19.85%、49.60%、71.16%。②HE染色结果提示UA处理后的肿瘤组织细胞间质增多,细胞密度下降,核分裂相减少,部份细胞出现核固缩、碎裂等凋亡形态改变,裸鼠重要器官未发现明显病理变化。③电镜下观察到实验组肿瘤组织凋亡形态学改变。④TUNEL法检测各组凋亡指数分别为1.70%±1.05,3.53%±0.60,13.47%±1.07,29.60%±2.89。⑤免疫组化染色提示UA上调肿瘤组织Bax表达,下调COX-2、Bcl-2表达。结论:UA能诱导体外培养的Eca-109细胞凋亡、抑制细胞增殖,其作用与下调Bcl-2、上调Bax的表达,提高P27kip1表达将细胞阻滞在G0/G1期有关;同时UA能抑制人食管癌裸鼠移植瘤生长,下调Bcl-2、上调Bax的表达诱导肿瘤细胞凋亡、抑制COX-2表达可能是其作用机制之一。