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家蚕是一种具有重要经济价值的鳞翅目模式生物,在理论研究和生产应用方面都具有重要作用。家蚕基因组框架图、精细图和全基因组表达芯片等研究工作的完成,为家蚕基因的鉴定与功能研究提供了丰富的数据资源。家蚕血细胞在家蚕代谢、先天免疫以及发育变态等方面扮演重要角色。尽管众多有关家蚕血细胞的相关基因已经被初步克隆与鉴定,但如何研究和应用这些基因仍然是亟待解决的问题。家蚕转基因关键理论及技术体系的构建,迫切需要家蚕血细胞特异表达启动子作为研究工具,来实现对家蚕血细胞的深入研究。对家蚕血细胞特异启动子的探索有助于血细胞相关基因功能的解析以及造血调控网络的深入研究,为家蚕血细胞研究体系奠定重要的理论基础。本研究利用家蚕组织芯片表达数据以及qRT-PCR方法筛选出三个血细胞特异表达基因；并基于家蚕基因组数据库分别对三个候选基因的启动子区域进行克隆；使用重组杆状病毒(rAcMNPV)为基因转移载体并结合流式细胞分析技术,分析候选基因启动子活性并对其蚕体组织特异性进行了验证。主要研究结果如下：1.家蚕血细胞特异表达基因的筛选基于家蚕组织芯片数据,通过qRT-PCR进行组织表达分析,最终筛选得到家蚕血细胞特异高表达的3个候选基因,分别为BmCathepsinO、Bmintegrinβ2、 Bm04862。BmCathpsinO属于半胱氨酸蛋白酶家族,主要参与溶酶体的水解作用；Bmintegrinβ2是家蚕整合素β家族成员之一,参与细胞表面粘附,并在家蚕细胞中发挥免疫功能；而Bm04862是一个未曾报道的新基因。2. BmCathepsin O启动子的克隆及活性分析基于家蚕基因组数据,克隆了BmCathepsin O基因5端约2000bp的侧翼区启动子pBmCatO2K,利用重组杆状病毒(rAcMNPV)作为基因转移载体,证明克隆的启动子序列在蚕体具有血细胞特异性活性。随后,选择5个不同大小的启动子片段pBmCatO1.5K、pBmCatO1K、pBmCatO0.5K、pBmCatO0.2K在蚕体进行启动子活性分析,结果表明,该启动子核心区域位于-80至+76bp,而一段254bp(-333～-80bp)的片段存在组织特异性调控元件,控制该基因在血细胞中的特异表达。3. Bmintegrin β2基因启动子克隆以及蚕体活性分析从Bmintegrinβ32基因转录起始位点上游分别选取了2,3和5 Kb启动子片段进行了克隆。发现pBmIntβ22K、pBmIntβ23K、pBmIntβ25K在细胞水平以及蚕体均不能驱动红色荧光蛋白表达,表明这3个启动子无活性。随后选取两个跨第一内含子的启动子pBmIntβ23KIN和pBmIntβ21.5KIN进行克隆,两启动子片段在病毒介导下在蚕血细胞有一定的启动子活性,在脂肪体和丝腺中无活性。结果表明启动子存在于第一内含子内或该区域存在增强元件,调控该基因的血细胞特异性。4.Bm0462基因鉴定及其启动子研究应用RACE技术获得Bm04862全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。Bm04862基因开放阅读框819bp,共编码273个氨基酸残基,预测其为跨膜蛋白；对Bm04862蛋白亚细胞定位表明其聚集在细胞核膜和部分细胞质中。qRT-PCR结果表明发该基因在家蚕血细胞感染外源大肠杆菌24h后表达量显著上调,推测该基因参与家蚕免疫防御。对其启动子区域进行克隆得到2194bp片段,病毒介导发现在BmE-SWU3细胞、蚕体血细胞,脂肪体以及丝腺体均能驱动DsRed表达,细胞水平流式分析其启动子活性为Pph启动子的4.8倍。Bm04862启动子具有较强的活性但无组织特异性,推测调控Bm04862启动子组织特异性的区域位于转录起始位较远的区域,或者因受到病毒的影响导致Bm04862启动子特征发生了改变。