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目的:本实验旨在研究生长因子非依赖性1转录阻遏物(GFI-1)在急性髓系白血病(AML)中的作用。我们实验发现低表达的GFI-1能诱导AML细胞株对帕比司他耐药,为了改善其治疗结果,我们进一步研究低水平GFI-1的AML细株耐帕比司他的具体机制。方法:本实验分为临床检测和体外实验两部分。在临床检测部分,我们一共收集筛选了64例除M3型以外的AML初诊患者骨髓血样本,同时收集23例健康捐赠者的骨髓血样作为对照组。分别提取样本中的单个核细胞,根据实验需要萃取mRNA与蛋白样本或进行进一步的培养。TCGA数据数据库比对不同水平的GFI-1、血红素加氧酶-1(HO-1)对患者总生存期(OS)的影响。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质印记法(Western blot)检测不同危险分层的AML患者与正常组的单个核细胞中GFI-1与HO-1的水平差异。CCK8检测不同水平的GFI-1患者对帕比司他的敏感性。在体外实验部分,我们使用GFI-1的小干扰RNA(si-GFI-1)减低HL-60、Kasumi-1细胞株中GFI-1的水平,再分别使用帕比司他处理si-GFI-1组和对照组各24小时。流式和CCK8检测调控GFI-1水平对AML细胞耐帕比司他的作用的影响。Western blot检测GFI-1对帕比司他诱导细胞相关凋亡蛋白作用的影响。接下来我们使用ZnPP与hemin进一步调控细胞中HO-1的水平。Western blot检测单独或联合调控AML细胞株中GFI-1和HO-1的水平并使用帕比司他处理细胞24h后的GFI-1、HO-1、HDAC1、HDAC2、HDAC3及蛋白凋亡与抗凋亡基因的表达。流式和CCK8分别检测单独或联合调控AML细胞株中GFI-1和HO-1的水平时细胞凋亡和细胞活性的改变,以及两者对帕比司他的敏感性的影响。接下来我们进行通路机制的探索,使用LY294002作为PI3K/Akt通路的抑制剂。Western blot检测单独使用帕比司他或联用si-GFI-1、ZnPP、hemin处理AML细胞时,PI3K/Akt通路的变化情况;以及联合使用LY294002抑制PI3K/Akt时,GFI-1、HO-1、相关凋亡蛋白和通路蛋白的变化情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,CCK8检测细胞活性。结果:通过TCGA数据数据库比对发现,低水平GFI-1的AML患者拥有更短的OS,而低水平HO-1的AML患者的OS更长。通过筛选后,我们一共收集了64例急性髓系白血病患者的初诊样本,观测两个疗程后根据病人预后情况将患者分为复发难治组(n=32)和完全缓解组(CR)(n=32),再收集23例正常供者作为对照组。使用Real-time PCR和Western blot检测三组样本中GFI-1的mRNA与蛋白水平,发现复发难治病人样本组中GFI-1水平显著低于CR组及正常组。与此同时,复发难治病人样本的HO-1表达高于化疗缓解病人及健康骨髓捐献者。将病人按照GFI-1水平高低再分组后发现,含有较低GFI-1水平的患者具有更高的HO-1、HDAC1、HDAC2和HDAC3水平,所有检测的差异均具有统计学意义。体外实验中,经过si-GFI-1处理的细胞组相较未敲除的细胞组具有更高的HO-1水平,并且使用相同浓度的帕比司他处理后si-GFI-1组有更低的凋亡率。这表明低表达的GFI-1能使细胞对帕比司他敏感性降低;随着GFI-1的减低,HO-1、Bax和Bcl-2上升,Bad下降。同时,调控细胞的HO-1水平对GFI-1的表达影响无显著差异,但降低HO-1能逆转由低表达的GFI-1所带来的耐药效应并增加凋亡蛋白Bad的表达。接下来通过通路探索发现,分别调控GFI-1和HO-1水平能影响PI3K/Akt通路,单独使用帕比司他同样能激活PI3K/Akt通路的磷酸化。当LY294002抑制p-Akt后不仅逆转了低表达GFI-1提高HO-1水平的作用,同时也缓解了由低水平GFI-1所诱导的AML细胞对帕比司他耐药的作用。结论:低表达的GFI-1水平能预示AML患者的不良预后。降低GFI-1水平能通过激活磷酸化的PI3K/Akt通路从而提高HO-1的表达,而通路的激活和HO-1的升高进一步降低了凋亡蛋白Bad的表达从而促进AML细胞对帕比司他的耐药。