玉米纹枯病是危害严重的玉米病害,立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)是玉米纹枯病的病原菌,其较强的致病及存活能力使玉米纹枯病的防治成为农业生产上的一大难题。基因的表达调控在生物体中具有至关重要的作用,而转录水平的调控是基因表达过程中最关键的一步,所以探索立枯丝核菌的转录调控机制对于防治玉米纹枯病具有重要意义。转录因子参与调控基因的转录效率,增强或抑制基因的表达,是转录调控的重要组成部分。在立枯丝核菌等病原真菌侵染寄主时,大量的转录因子参与到增强致病力、破坏寄主防御系统等过程中。所以,对立枯丝核菌转录因子的研究,能够更加深入的了解立枯丝核菌在生长发育、应对环境压力和侵染过程中的转录调控机制,不仅为后续的研究提供有益参考,而且在农业病害防治领域具有重要的应用价值。本试验着重于立枯丝核菌转录因子的研究,通过建立立枯丝核菌c DNA文库,利用酵母双杂交自激活现象筛选到71个具有转录激活功能的自激活c DNA序列,并鉴定其中41条为转录因子。此方法结合了传统实验与数据库分析,高效、准确地验证了转录因子的转录激活功能,对于阐明玉米纹枯病的生长周期具有重要的意义。将这71条自激活序列在NCBI的Blastx中进行比对,找到每条序列所编码的蛋白,其中能找到同源蛋白的有55条,占全部序列的77.5%;未找到确切同源蛋白的16条,占22.5%。运用数据库比对的方法,将这71条自激活序列放入真菌转录因子数据库中进行比对,其中41条能匹配到转录因子序列,其余30条序列未能得到匹配。这些鉴定到的转录因子分别来自13个转录因子家族,包括Zn2Cys6、Winged helix repressor DNA-binding、HMG等,在生长代谢,抗药性,侵染寄主等方面发挥重要作用。至于未鉴定到的转录因子,因为我们已经用自激活实验的方法证明了这71个蛋白的转录激活功能,而且转录因子数据库的数据资源并非是最新的,有很多新发现的转录因子未在数据库中得到说明和归类,所以可以初步判断这30条序列是潜在的、新发现的转录因子。最后将所有71条序列放入SMART数据库中进行保守结构域分析,41个已鉴定的转录因子都能检测到确定的结构域,其中大部分是常见的转录因子结构域;而未鉴定到的30个新转录因子中有10个未检测到确定的结构域,这有可能是导致部分序列未在转录因子数据库中得到鉴定的原因。所以,数据库中的空白更好的说明本试验所采用的文库自激活筛选方法不仅可以在立枯丝核菌c DNA文库中准确地验证已知的转录因子,还能筛选到新的、潜在的转录因子,这对于后续的转录因子调控研究和对立枯丝核菌生长代谢、抗逆性等方面的探索都有很大的帮助。