论文部分内容阅读
目的:本题通过酒精灌胃的方法,建立慢性酒精性中毒大鼠的模型,运用Morris圆形水迷宫、免疫组化等方法及手段,观察头穴丛刺对慢性酒精中毒性大鼠学习记忆能力和HIF-1a表达的影响,从不同的层面探讨针刺对于慢性酒精性中毒的治疗的作用机制,发挥针灸的治疗作用,以便更好的指导临床治疗工作。方法:采用Morris圆形水迷宫训练,剔除游泳能力差的大鼠,筛选出游泳能力正常的雄性Wistar大鼠100只,随机分为空白对照组25只、酒精中毒组75只。酒精中毒组大鼠参照许亚军制备慢性酒精中毒大鼠的造模方法,采用浓度为55%酒精以10ml/kg/d(勾兑生理盐水至5ml)灌胃方法进行酒精灌胃造模,空白对照组采取灌取相同体积(5ml)的生理盐水。造模前、后采用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力。酒精中毒组大鼠造模成功后剩余60只将大鼠随机分为模型组、头穴丛刺组、盐酸多奈哌齐组各20只。模型组和空白对照组给予日一次抓取,同时以相同体积的生理盐水(5ml)灌胃日一次。头穴丛刺组大鼠给予头穴丛刺治疗,参照《实验动物穴位图谱》取大鼠的百会及百会旁开2 mm三个穴位,针与皮肤呈15°斜刺,留针30min,每15min捻针一次,频率为100r/min,每次捻转2分钟,每日两次,共治疗4星期。盐酸多奈哌齐组根据人与动物体表面积计算法换算,予盐酸多奈哌齐溶于 0.5%羧甲基纤维素钠溶液中,给予大鼠0.05mg/kg灌胃治疗,日 1次,与头穴丛刺组大鼠的治疗在同一时间段进行,连续治疗4周。空白对照组、模型组:对大鼠进行抓取捆绑处理,隔日一次,每次3 0 m i n,共4周。各组大鼠分别造模前、造模后、治疗后4星期后采用Morris水迷宫检测大鼠的逃避潜伏期和穿台次数来判断大鼠的学习记忆能力。运用HE染色法观察慢性酒精中毒模型大鼠海马区细胞形态的改变。应用免疫组化方法观察大鼠的海马CA1区病理变化和HIF-1a的表达。统计学处理数据采用 SPSS17.0统计软件,各组大鼠行为学测试所得的数据及免疫组化HIF-1a的测定值均采用均数±标准差(x±s)表示,组内比较采用配对t检验,组间比较采用单因素方差分析,方差齐之后组间两两比较采用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1、Morris水迷宫测试:(1)空间学习能力:造模前,各组大鼠的找到平台所需的时间即逃避潜伏期进行组间比较,无统计学差异(P>0.05)。造模6周,头穴丛刺组、模型组、盐酸多奈哌齐的逃避潜伏期延长,比空白对照组比较时间延长,与空白对照组相比较具有统计学意义(P<0.05);造模前、后头穴丛刺组、模型组、盐酸多奈哌齐组大鼠的逃避潜伏期进行比较,具有统计学意义(P<0.05)。治疗4周后,头穴丛刺组和多奈哌齐组与模型组相比,逃避潜伏均缩短有统计学意义(P<0.05);头穴丛刺组与多奈哌齐组比较其逃避潜伏期时间均缩短无显著差异(P>0.05),无统计学意义。(2)空间记忆能力:在空间探索试验中与模型组大鼠进行比较,头穴丛刺组和多奈哌齐组均显著增加穿台次数,具有统计学意义(P<0.05),头穴丛刺组和多奈哌齐组比较其差异性不明显(P>0.05)。2、HE染色:空白组大鼠染色后其病理改变不明显,模型组大鼠染色后大部分神经元细胞明显固缩,胞体形态各异,包浆浓缩,颜色深染,核仁缩小,甚至消失,神经元细胞周边出现空壳区域;头穴丛刺组和多奈哌齐组神经细胞形态较完整,偶见固缩的细胞,与模型组比较细胞的破坏程度较轻,头穴丛刺和多奈哌齐组比较,其固缩细胞少于多奈哌齐组。3、HIF-1a的表达:免疫组化空白组偶见HIF-1a 阳性细胞表达,模型组、头穴丛刺组、盐酸多奈哌齐组均可见HIF-1a表达增高,与空白组比较差异具有统计学意义(P<0.05);头穴丛刺组和盐酸多奈哌齐组较模型组表达较低(P<0.05)。结论:1、通过Morris水迷宫检测头穴丛刺组和盐酸多奈哌齐组均可使慢性酒精中毒大鼠的逃避潜伏期缩短及穿台次数的增加,改善了慢性酒精中毒大鼠的空间学习和记忆功能,且两者疗效相当;2、通过HE染色,从细胞学观察慢性酒精中毒大鼠的海马CA1区的病理学改变,头穴丛刺组和多奈哌齐组神经细胞形态的破坏程度较模型组程度较轻;3、提示头穴丛刺可能通过影响HIF-1a的表达达到保护脑组织的作用,减少脑组织的损伤,从而改慢性酒精中毒大鼠的学习记忆能力。