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目的：通过观察连翘酯苷A(forsythoside A，FA)对内毒素血症小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cell，Treg)百分率、脾脏Foxp3基因表达、血清中IL-10和TGF-β1含量的影响；及对内毒素诱导淋巴细胞48h后细胞生存率、Treg百分率、转录因子Foxp3表达、细胞因子IL-10和TGF-β1分泌的影响；探讨连翘酯苷A的免疫调节作用及其可能机制。方法：1连翘酯苷A对内毒素血症小鼠Treg的影响1.1模型建立：通过腹腔注射LPS10mg/kg，建立内毒素血症小鼠模型。1.2实验分组：随机分配48只BALB/c小鼠为正常对照组(Control)，内毒素模型组(LPS)，CD25抗体组(anti-CD25)，FA高、中、低剂量组共6组；Control、LPS、anti-CD25组均腹腔注射生理盐水0.5ml/d，连续7天；其中anti-CD25组第二天腹腔注射anti-CD251.2mg/kg耗竭Treg为阳性对照；FA高、中、低剂量组分别腹腔注射FA80mg/kg、20mg/kg、5mg/kg，连续7天；第8天Control组仍腹腔注射生理盐水，其他组均腹腔注射LPS10mg/kg，4h后留取外周血和脾组织待测。1.3各项指标的观察和检测：①观察小鼠一般表现情况；②流式细胞术检测外周血Treg百分率；③Real-Time PCR检测脾脏Foxp3mRNA的表达；④Westernblot检测脾脏Foxp3蛋白的表达；⑤ELISA检测外周血清IL-10、TGF-β1的含量。2连翘酯苷A对LPS作用的小鼠淋巴细胞的影响2.1提取原代淋巴细胞：无菌取脾，于200目网上小心研磨，并用400目网过滤，采用密度梯度离心法，制备原代单细胞悬液。2.2实验分组：将实验分为正常对照组(Control)，内毒素模型组(LPS)，FA高、中、低剂量组，多黏菌素B组(PMB)共6组。Control组常规培养；LPS组加100ng/ml LPS刺激48h；FA高、中、低剂量组和PMB组分别加入FA320ug/ml、80ug/ml、20ug/ml及PMB10ug/ml预处理细胞2h，再给予100ng/ml LPS刺激48h。2.3各项指标的检测：①MTT法检测细胞存活率；②流式细胞术检测总淋巴细胞中Treg百分率；③Real-Time PCR检测细胞中Foxp3mRNA的表达；④Western blot检测细胞中Foxp3蛋白的表达；⑤ELISA检测细胞培养液中IL-10、TGF-β1的含量。结果：1连翘酯苷A对内毒素血症小鼠Treg的影响1.1小鼠一般表现情况：造模后，LPS组小鼠比正常组精神萎靡，抓取时反应迟钝；抗体和FA干预组小鼠变化不明显。1.2小鼠外周血Treg百分率变化：LPS组小鼠外周血Treg比例大幅上升(P<0.01)；与LPS组相比，FA高剂量干预明显使外周血Treg比例降低(P<0.01)。1.3小鼠脾组织Foxp3mRNA和蛋白的表达：与Control组比，LPS组Foxp3mRNA表达显著上调(P<0.01)；用anti-CD25或FA干预，Foxp3mRNA表达量明显下降(P<0.01，P<0.05)。FA三组呈剂量依赖关系，实验各组Foxp3蛋白表达的变化与Foxp3mRNA相似。1.4小鼠血清中IL-l0和TGF-β1的水平：LPS组小鼠的IL-10含量明显高于Control组，差异十分显著(P<0.01)；anti-CD25耗竭Treg及FA干预可有效降低小鼠血清IL-10水平(P<0.01，P<0.05)。TGF-β1变化不如IL-10明显。2连翘酯苷A对LPS作用的小鼠淋巴细胞的影响2.1细胞生存率的变化：相比于Control组，LPS组细胞存活率显著性下降(P<0.01)；高、中、低剂量FA预处理均可明显提高细胞存活率(P<0.01,P<0.05)，且存在剂量依赖性；其中FA高剂量组与Control组比无显著性差异(P>0.05)。2.2总淋巴细胞中Treg百分率变化：Control组中Treg比例为5%~10%，LPS组Treg比例上升十分显著，差异有统计学意义(P<0.01)；用PMB及FA干预后比例下降且FA三组呈剂量依赖关系(P<0.05)。2.3Foxp3mRNA和蛋白的表达：Control组细胞表达少量Foxp3mRNA，给予LPS刺激48h，Foxp3mRNA表达明显升高(P<0.01)；各剂量FA都能不同程度的降低Foxp3mRNA的表达(P<0.05)，以高浓度FA作用最显著(P<0.01)。蛋白表达的变化与Foxp3mRNA相似。2.4IL-10和TGF-β1的水平：给予LPS刺激后，细胞培养液中细胞因子IL-10和TGF-β1的含量明显升高(P<0.01)，FA干预可降低其水平(P<0.05)，对TGF-β1的影响不如IL-10明显。结论：腹腔注射连翘酯苷A可降低内毒素血症小鼠外周血Treg水平和Foxp3基因表达，连翘酯苷A预处理能抑制LPS引起的淋巴细胞中Treg比例升高和Foxp3表达上调，因此，从体内和体外均证实了连翘酯苷A具有免疫调节作用，作用机制可能与其干扰Foxp3基因表达，抑制细胞因子lL-10和TGF-β1的分泌有关。