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目的脓毒症(sepsis)是指机体被血液或组织中的各种致病微生物或其毒素侵袭所致的一种全身性炎症反应,可导致器官损伤甚至多器官功能障碍综合征(MODS)。肾脏是脓毒症早期最易受损的器官之一。对脓毒症急性肾损伤的早期干预,是脓毒症治疗中不容忽视的问题。角质细胞生长因子(keratinocyte growth factors,KGFs)属于成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs),是一类能与肝素结合的重要的多肽生长因子,目前有两个成员,即KGF-1(也叫FGF-7)和KGF-2(也叫FGF-10),由间充质细胞产生,以自分泌或旁分泌的方式特异性刺激上皮细胞的增殖,与器官发育和自稳有关。对各种类型的上皮细胞来说,KGF是一种有效而特殊的分裂素,能够保护细胞免受各种损伤,对受损上皮组织的修复具有重要作用。目前KGFs在口腔、喉粘膜、中耳胆脂瘤以及急性肺损伤、肠辐射损伤、肿瘤等中的表达及意义已有相关报道。而关于KGFs在脓毒症受损肾脏中的表达及修复方面的报道较少。本实验通过建立脓毒症大鼠模型,研究KGFs在脓毒症受损肾脏中的动态变化及意义,探讨脓毒症病理过程中肾脏损伤修复的部分机制。方法一、动物模型及分组本实验是在中国医科大学盛京医院实验动物中心完成。6周龄WISTER健康雄性大鼠80只,体重160～210克,以随机排列表法随机分为:脓毒症组(A组)40只、假手术组(B组)40只。用CLP法制备脓毒症大鼠模型。A、B两组均设3h、6h、12h、24h和36h五个亚组,每亚组8只,分别在各时间点留取标本。二、标本采集及处理腹主动脉抽血2ml,1.5ml离心3000转/分15分钟,取血清待测血肌酐、尿素氮,0.5ml待测白细胞。取大鼠左肾切开置于10%福尔马林中固定,石蜡包埋,HE染色法光镜下观察肾脏结构改变。取大鼠右肾,剥离表面脂肪后包入无菌锡纸中置液氮罐内,再转移至-80℃冰箱,待做免疫组化和实时荧光定量PCR。三、实验方法采用生化自动分析仪检测血肌酐、尿素氮;免疫组化SABC染色法检测肾脏组织中KGF-1、KGF-2蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测肾脏组织中KGF-1mRNA及KGF-2mRNA的相对表达量。四、统计学分析采用SPSS 15.0统计软件进行统计学处理,计量资料以均数士标准差表示,采用单因素方差分析和t检验、pearson相关分析,以α=0.05(双侧)为检验水准,P＜0.05具有统计学意义。结果一、肉眼观各组肾脏的改变A组肾脏表面色泽暗红,术后24h可见包膜下点状、片状出血,触之较硬,弹性差;B组肾脏表面有轻度充血、水肿,弹性较好。二、光镜下HE染色各组肾脏的改变A组肾脏24h可见肾小管空泡变性,大量中性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞浸润,局部有点状出血、坏死,依据文献中张氏肾损害分级标准,符合Ⅲ级肾损害。B组较正常无明显改变。三、血生化指标的改变A组血肌酐、尿素氮均术后24h达峰值,除3h与B组无显著差别外,6h、12h、24h、36h均高于B组,差异有统计学意义(P＜0.01)。四、免疫组化染色及图象分析KGFs在A、B两组肾脏中均有表达,主要集中在髓质肾小管,皮质肾小管也有分布。光镜下肾小管上皮细胞胞浆染色,可见棕黄色、深褐色颗粒。KGF-1动态变化:与B组相比,A组术后3h无显著增高(P＞0.05),术后6h表达最强,12h有所回落,24h出现第二次峰,36h又有所下降,但均明显高于B组(P＜0.01)。而B组各时点无显著波动。KGF-2动态变化:与B组相比,A组术后3h、6h均无显著差异(P＞0.05)。术后12h表达最强,较B组显著增高(P＜0.01),之后逐渐下降,但24h(P＜0.05)、36h(P＜0.01)仍强于B组对应时点。五、实时荧光定量PCRKGF-1动态变化:术后3h,A组与B组KGFmRNA相对拷贝数无显著差异(P＞0.05)。此后A组KGF表达量迅速上升,术后6h达峰值,12h有所下降,24h再次上升,36h又有回落,较B组均有显著差异(P＜0.01)。而B组仅6h略有上升,其余各时点无明显波动。KGF-2动态变化:术后3h、6h,A组与B组KGFmRNA相对拷贝数无显著差异(P＞0.05)。A组术后12h表达量达峰值,此后逐渐下降,12h、24h、36h均较B组有显著差异(P＜0.01)。六、KGFs与BUN、Cr的相关性分析KGF-1mRNA:与BUN成正相关,r=0.504,P=0.001＜0.01;与Cr成正相关,r=0.382,P=0.015＜0.05。KGF-2mRNA:与BUN成正相关,r=0.426,P=0.006＜0.01;与Cr成正相关,r=0.555,P=0.000＜0.01。结论1、KGFs在正常大鼠肾脏中即有表达,主要集中在髓质肾小管上皮细胞,皮质肾小管也有分布。KGF-2的表达量较少,KGF-1表达量明显高于前者,且表达量上调的起始时间早、持续时间长,但不足以证明其在损伤修复机制中作用优于前者。2、脓毒症受损肾脏中的KGFs表达显著增强且与肾脏损伤程度呈正相关。推测KGFs是影响感染后肾脏损伤修复的重要因素之一。