CDC25B,C的mRNA的选择性剪接变化与宫颈癌细胞抗顺铂的关系研究

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宫颈癌是女性最多见的恶性肿瘤,严重威胁着女性的健康与生活。顺铂是治疗宫颈癌的常用化疗药物,但癌细胞对顺铂的抗药性使其治疗效果大为减弱。在用顺铂处理的宫颈癌细胞SiHa,C33A中,CDC25B 与 CDC25C基因的mRNA的选择性剪接发生了改变,由于CDC25B 与 CDC25C在正常生理条件下和应对DNA损伤时对细胞周期的检查点功能有重要的调控作用,因此推测CDC25B与CDC25C基因的mRNA的剪接变化很可能与细胞耐受顺铂有关。本研究拟探究CDC25B与CDC25C的各主要剪接isoforms具有抗凋亡还是促凋亡的作用?这一剪接变化是否增加了宫颈癌细胞对顺铂的抗性?得到的结果和信息将有助于阐明CDC25B 与 CDC25C在肿瘤发生与发展中的作用,解读肿瘤细胞对放化疗‘抗性的机制。如果CDC25B 与 CDC25C 的 mRNA的剪接变化会影响其checkpoint的功能,则对其的调节有可能会提高顺铂的疗效,调节的途径和基因将成为新的治疗靶点,为癌症的个体化治疗提供重要的信息和依据。目的:探究CDC25B与CDC25C 的 mRNA的选择性剪接变化对宫颈癌细胞SiHa和C33A的生长、增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。方法:应用MTT比色法确定宫颈癌细胞SiHa, C33A的顺铂半致死量浓度;RT-PCR检测相同时间、不同浓度顺铂干预及不同时间、半致死量顺铂干预对各组宫颈癌细胞CDC25B, C的mRNA的选择性剪接的影响;将CDC25B1,B3及CDC25C1.C5基因转染宫颈癌SiHa, C33A细胞,RT-PCR 及 Western Blot分别检测转染细胞中CDC25B1, B3, C1, C5 的 mRNA和蛋白表达水平;MTT比色法测量CDC25B1, B3, C1, C5基因过表达的宫颈癌SiHa, C33A细胞的顺铂半致死量浓度,与之前比较得出结论。结果:SiHa细胞顺铂的半致死量浓度约为40μmol/L,C33A细胞顺铂的半致死量浓度约为22.5 μmol/L。选取差异最为明显的CDC25B1,B3, C1, C5四种剪接体进行转染、上调,RT-PCR及Western Blot分别检测到相应的mRNA和蛋白表达均上调;MTT比色法测量顺铂半致死量浓度发现,与之前所得到的顺铂半致死量浓度相比,分别上调了CDC25B1与CDC25C1的细胞组的顺铂半致死量浓度显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);而分别上调了CDC25B3与CDC25C5的细胞组的顺铂半致死量浓度显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:CDC25B的mRNA的剪接体CDC25B1能够增强宫颈癌细胞系SiHa, C33A对顺铂的抗性;剪接体CDC25B3能够减弱宫颈癌细胞系SiHa,C33A对顺铂的抗性。CDC25C的mRN A的剪接体CDC25C1能够增强宫颈癌细胞系SiHa,C33A对顺铂的抗性;剪接体CDC25C5能够减弱宫颈癌细胞系SiHaC33A对顺铂的抗性。
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