为研究牛乳腺上皮细胞（BMEC）增殖和分化特性及为生产转基因动物创造条件，建立了适合 BMEC 体外增殖的培养体系。基础培养液用 DMEM/F12,含胎牛血清 100mL，青霉素 0.05g/L 及链霉素 0.05g/L。在此基础上，以不同的组合分别添加胰岛素转铁蛋白硒钠（10mL/L），17β-雌二醇（5mg/L），氢化可的松（5mg/L），表皮生长因子(20ug/L)，配成 A1,A2,A3,A44 种不同的培养液。从细胞形态、细胞群体倍增时间、细胞生长曲线等方面考察了不同生长因子对 BMEC 的促生长作用。通过有效的细胞培养方法获得牛乳腺上皮细胞系，系统观察了乳腺上皮细胞的长出、贴壁、聚集、迁移、分裂、分化、调亡等一系列形态变化。其结果如下：1．胰岛素转铁蛋白硒钠（ITS）是原代培养和传代 BMEC 所必需的；表皮生长因子（EGF） 可以明显促进 BMEC 的生长增殖。在该培养体系中，BMEC 的原代培养和传代培养均不 需要生长基质的作用。2．细胞生长曲线表明，传代培养的乳腺上皮细胞在接种后有 2d 的滞留期，之后为对数 生长期，持续 4d 左右，第 7d 进入平台期。3．BMEC 的适宜冻存液为 DMEM/F12，添加 30%FCS 和 10%的二甲基亚砜（DMSO），适宜的冷 冻降温方法是以-1℃/min 的速度从 4℃降至-25℃，30min 后投入液氮进行低温保存。4．用含胰岛素转铁蛋白硒钠、氢化可的松、孕羊血清的 DMEM/F12 做为细胞分化诱导液， 诱导 BMEC 分化，用间接 ELISA 法进行 BMEC 的酪蛋白分泌的检测。结果表明，培养 的是牛乳腺上皮细胞，该细胞系保持了分泌酪蛋白的功能。5．BMEC 和成纤维细胞混生时分区生长，界限明显。传代的乳腺上皮细胞呈岛屿状聚集 生长。可以形成网状结构，圆顶形结构。细胞核呈圆形或椭圆形，核仁 2－4 枚。6．雌激素具有诱导体外培养的 BMEC 发生癌变的可能。BMEC 出现多核，多核仁现象，但 细胞之间仍表现一定的接触性抑制。7．多次传代后的 BMEC 含不同的细胞类型。