论文部分内容阅读
目的:应用分子生物学实验技术,观测眼针对腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant- irritable bowel syndrome,D-IBS)模型大鼠结肠血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)及其受体1(VIP1-R)表达影响,探讨眼针治疗D-IBS的作用机制,为眼针治疗D-IBS的科学内涵提供实验依据。方法:健康SPF级雄性Wistar大鼠,体重200±20g,共40只。按体重分成4组,即对照组、模型组、眼针组、匹维溴胺组(下简称西药组),分笼饲养,每笼5只,共计8笼。采用应激结合束缚的方法复制D-IBS动物模型,经过18d造模,按照模型评价标准鉴定模型,模型复制成功。对照组予以等容量的生理盐水灌胃18d,自由摄取标准饮食和水,无刺激饲养7d;模型组造模结束后,自由摄取标准饮食和水,无刺激饲养7d;予针灸组7d的眼针治疗;西药组依据“等效剂量”原则,以15mg/kg千克的匹维溴胺灌胃给药7d。标本采集:治疗结束后将大鼠处死,取距肛门10cm处结肠1-2cm,用眼科剪刀延结肠长轴将结肠展开,用生理盐水冲洗干净,用灭菌锡纸包好结肠组织并且明确标号后,放在-70℃保存,备用。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠结肠组织VIP及VIP1-R mRNA的表达,用ELISA方法检测各组大鼠结肠组织中VIP相对含量,用免疫组化方法检测各组大鼠结肠组织VIP及VIP1-R蛋白的表达并进行分析。应用SPSS10.0统计软件。结果:1.排便粒数显示:与对照组比较,模型组、眼针组、西药组排出粪便颗粒明显增加(P<0.01)。排出玻璃小球时间显示:与对照组比较,模型组、眼针组、西药组排出玻璃小球时间显著缩短(P<0.01)。大鼠的腹部回缩反射半定量评分显示:与对照组比较,模型组、眼针组、西药组大鼠结肠扩张时大鼠腹肌收缩反应进行半定量评分明显升高且差异性显著(P<0.01)。大鼠结肠组织病理学显示:各组大鼠结肠组织结构正常,结肠粘膜上皮呈单层柱状,固有层可见粘膜肌层,疏松的粘膜下层外可见肌层。粘膜上皮完整,均无充血、水肿、溃疡,无炎症细胞浸润间质无水肿等病理组织学改变,表明D-IBS模型复制成功。2.以β-actin作为内参,与对照组比较,模型组结肠组织中VIP及VIP1-R mRNA表达上调(P<0.01);与模型组比较,眼针组与西药组结肠组织中VIP及VIP1-R mRNA表达下调(P<0.01);眼针组与西药组两组间结肠组织中VIP及VIP1-R mRNA表达比较均无显著性差异(P>0.05)。3.ELISA方法检测所示:与对照组比较,模型组结肠组织中VIP相对含量显著上升(P<0.01);与模型组比较,眼针组与西药组结肠组织中VIP相对含量明显降低(P<0.01);后两者组间比较无显著性差异(P>0.05)。4.免疫组化法检测显示:与对照组比较,模型组结肠组织中VIP及VIP1-R蛋白表达明显上调(P<0.01);与模型组比较,眼针组与西药组结肠组织中VIP及VIP1-R蛋白表达明显下调(P<0.01);后两者组间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:1 D-IBS模型大鼠排便粒数增多、排出玻璃小球时间缩短、大鼠的腹部回缩反射半定量评分达到2分以上、大鼠结肠组织病理学无改变。2 D-IBS模型大鼠结肠组织中VIP相对含量上升、VIP mRNA及蛋白表达上调;眼针能使结肠组织中VIP相对含量降低、VIP mRNA及蛋白表达下调。3 D-IBS模型大鼠结肠组织中VIP1-R mRNA及蛋白表达上调;眼针能使结肠组织中VIP1-R mRNA及蛋白表达下调。