壮药国虾薄(绞股蓝)皂苷抗肿瘤作用及对胆固醇影响

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目的:从壮药国虾薄(绞股蓝)中分离鉴定皂苷类活性成分。通过体内外实验探索国虾薄皂苷抑制肿瘤的作用。通过构建过表达细胞株探索国虾薄皂苷与胆固醇之间的关系,进一步阐述国虾薄皂苷抗肿瘤的作用机理。方法:1.腋部皮下接种LLC细胞制作Lewis小鼠肺癌模型。国虾薄皂苷及顺铂对照药通过腹腔注射方法给药。给药结束,解剖小鼠获得实验材料。对实验材料及数据处理分析不同组之间的异同。2.对国虾薄进行高温高压处理,用80%乙醇回流提取有效成分。利用大孔树脂除糖,硅胶柱分离,C18反相柱中压制备分离,高效液相纯化等获得国虾薄皂苷单体。通过UV,IR,NMR,MS,TLC硅胶板和高效阴离子交换色谱-脉冲安培法等手段综合分析化合物的成分信息,鉴定单体的化学结构。3.对人肺癌细胞A549,H1299,人胃癌细胞SGC7901,人肾癌细胞T24,人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,人白血病细胞K562,筛选获得的化合物单体药效。以人肺癌A549细胞为模式细胞检测分离获得的化合物的体外活性。CCK8法检测肿瘤细胞体外抑制率;TUNEL染色法检测诱导细胞凋亡活性;JC-1试剂染色给药后细胞检测线粒体膜通透性;细胞集落形成实验及碘化丙啶染色后用流式细胞仪检测细胞周期实验分析国虾薄皂苷对细胞增殖变化;划痕实验,Transwell小室实验分析新化合物在侵袭转移等方面的作用。4.国虾薄皂苷与胆固醇在体外结合,通过HPLC法检测结合后上清中胆固醇残留,验证国虾薄皂苷与胆固醇关系。5.构建胆固醇相关基因HMGCR,LPCAT3的过表达质粒,利用腺病毒包裹后转染A549细胞,构建过表达细胞株。用国虾薄皂苷作用于过表达细胞株与野生型,考察其相关变化。构建CRISPR敲除质粒,通过电转化将质粒导入细胞。结果:1.解剖获得Lewis肺癌小鼠肿瘤,称量及测量结果显示国虾薄单独给药组相对模型组具有一定的抑制作用。阳性药物顺铂组药效更好,国虾薄皂苷低剂量与顺铂联合用药组效果最好。抑瘤率结果显示Lewis肺癌肿瘤抑制效果由强到弱依次为:PL组(90.55%)
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