奶牛乳房炎是损害奶业生产的重大疾病之一。虽然乳房炎的病原具有复杂性与多样性，但主要以细菌为主。本研究通过对甘肃地区奶牛乳房炎组织病理学观察、主要病原菌耐药性调查及无乳链球菌病致病基因分析，筛选具有疫苗价值的抗原基因，为奶牛乳房炎的防治奠定一定基础性。从屠宰场采取的健康奶牛乳腺组织和患牛乳腺组织样品，经HE染色常规病理诊断。结果表明：光镜下因奶牛乳房炎的病程不同，表现出病理组织学形态各有差异。从甘肃部分奶牛场采集的奶牛乳房炎病乳中分离出无乳链球菌32株、金黄色葡萄球菌15株、大肠杆菌13株、停乳链球菌4株，采用K-B纸片法，测定这些菌株对临床应用主要抗生素的耐药情况。结果显示，四种细菌均有不同程度的耐药性，头孢菌素、氧氟沙星、环丙沙星、氟苯尼考、恩诺沙星、先锋必/舒巴坦是对四种细菌起抑制作用的主要药物，敏感度为60%～100%；四种细菌对青霉素、链霉素和磺胺甲基异恶唑产生较强的耐药性。利用THB固体培养基、色素试验培养基选择培养无乳链球菌，参照GenBank中无乳链球菌16SrRNA序列设计引物，对奶样中分离的12株疑似无乳链球菌进行鉴定。结果显示，12株细菌均可扩增出预期大小的单一条带。基因序列和系统发育分析，16S rRNA基因序列与NCBI上报道的序列高度同源(>99.0％)，各分离菌株间的16S rRNA基因序列也高度同源(99.0％～100％)。Sip基因是无乳链球菌重要的黏附定植因子，具有高度保守核酸序列和很强的免疫原性，是重要的候选抗原。通过常规PCR扩增Sip基因，它包含1305bp碱基，编码434个核酸，推导氨基酸的分子质量为56Ku。BLAST分析它与其他在GenBank上注册的基因序列有很高同源性（91.0%～99%)，推导的氨基酸序列的同源性为90.2%～98.8%。无乳链球菌甘肃株Sip基因与中国其他地区奶牛分离B族链球菌基本相似。将Sip基因与pET-28a连接，成功构建了原核重组质粒pET-28a-sip。用IPTG对BL21（pET-28a-sip）阳性重组菌诱导表达，当IPTG终浓度为1mmol/L时，可有较高的诱导表达量。Wester-blot结果显示，表达目的蛋白56ku为特异性表达产物。根据GenBank已报道的无乳链球菌CAMP基因序列，经ORF分析和B细胞表位预测，利用Primer5.0软件设计CAMP因子引物，添加酶切位点和真核表达元件，连接pcDNA3.1V5-HisA载体，转化DH5α感受态细胞，提取重组质粒进行酶切鉴定。结果显示，成功构建了真核表达载体(pcDNA-cfb)，为进一步研究无乳链球菌基因工程疫苗提供了基础性条件。